本文選題：缺氧誘導(dǎo)因子-1α + 細(xì)胞紅蛋白��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠低壓缺氧損傷模型,采用RT-PCR和免疫熒光組織化學(xué)技術(shù),研究低壓缺氧性腦損傷后缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)和細(xì)胞紅蛋白(Cygb)在腦組織海馬區(qū)的表達(dá)部位及時(shí)序性變化特點(diǎn),探討它們之間的相互關(guān)系以及在低壓缺氧性腦損傷中的作用。 方法:選用清潔級(jí)成年雄性SD大鼠60只,體重280~320克。隨機(jī)分為對(duì)照組及低壓缺氧6h、12h、18h和24h組。建立大鼠低壓缺氧損傷模型;H.E、甲苯胺蘭染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)改變;物理方法檢測(cè)腦含水量;生化手段檢測(cè)腦組織SOD、CAT、NOS活性及MDA、NO含量。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠腦海馬區(qū)HIF-1α和Cygb mRNA表達(dá)水平。采用免疫熒光雙標(biāo)記技術(shù),利用激光共聚焦顯微鏡,觀察低壓缺氧腦損傷后HIF-1α和Cygb在大鼠海馬各區(qū)神經(jīng)細(xì)胞中的定位及時(shí)序性變化特點(diǎn)。 結(jié)果:1低壓缺氧損傷后腦組織形態(tài)學(xué)改變:腦冠狀切片H.E染色可見(jiàn)海馬CA1區(qū)對(duì)低壓缺氧最為敏感。低壓缺氧6h組CA1區(qū)大部分神經(jīng)細(xì)胞胞體縮小,胞核固縮,核仁消失,胞漿深染,同質(zhì)性嗜酸性著色(紅色神經(jīng)細(xì)胞);海馬CA2、CA3、CA4區(qū)以細(xì)胞水腫為主,神經(jīng)細(xì)胞胞體腫脹,胞漿不規(guī)則淡染,胞核腫大淡染或消失。低壓缺氧12h、18h和24h組海馬各區(qū)細(xì)胞均以壞死和凋亡為主;隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)損傷逐漸加重�？梢�(jiàn)大部分細(xì)胞皺縮變形,胞漿深染,核碎裂及核溶解,間質(zhì)中充滿(mǎn)細(xì)胞碎片和凋亡小體。對(duì)照組甲苯胺蘭染色后神經(jīng)細(xì)胞胞核呈淡藍(lán)色,胞漿可見(jiàn)大量深藍(lán)色粗顆粒狀Nissl體。各低壓缺氧組H.E染色中所見(jiàn)的紅色神經(jīng)細(xì)胞,甲苯胺蘭染色呈均一深藍(lán)色,Nissl體消失;H.E染色胞體腫脹、胞漿淡染細(xì)胞,甲苯胺蘭染色整個(gè)細(xì)胞呈淡藍(lán)色,Nissl體減少或消失。 2腦含水量檢測(cè)結(jié)果:各低壓缺氧組腦含水量隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加,與對(duì)照組相比均有顯著差異(P0.01)。 3生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:各低壓缺氧組腦組織中SOD、CAT活性隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低,與對(duì)照組相比均有顯著差異(P0.01);與對(duì)照組相比,各低壓缺氧組腦組織NOS活性均明顯升高(P0.01)。與對(duì)照組相比,低壓缺氧12h組MDA含量才出現(xiàn)明顯增加(P0.05);18h、24h組MDA含量顯著增加(P0.01),隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸增加趨勢(shì)。與對(duì)照組相比,NO含量也隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加,除低壓缺氧6h組外,其余各組NO含量均與對(duì)照組有顯著差異(P0.01)。 4 RT-PCR結(jié)果: (1) HIF-1α:對(duì)照組中HIF-1α無(wú)表達(dá),低壓缺氧損傷后出現(xiàn)表達(dá)并隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增高,表現(xiàn)出時(shí)間依賴(lài)特點(diǎn)。各低壓缺氧組與對(duì)照組相比均有顯著差異(P 0.01)。 (2) Cygb:對(duì)照組Cygb呈低表達(dá);與對(duì)照組相比,低壓缺氧6h組(P0.05)和12h、18h、24h組(P 0.01)Cygb表達(dá)量均顯著增加,并表現(xiàn)出時(shí)間依賴(lài)特點(diǎn)。 5免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果:HIF-1α免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞呈綠色熒光,Cygb免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞呈紅色熒光,兩者共定位顯示黃色熒光。對(duì)照組海馬各區(qū)均未見(jiàn)HIF-1α陽(yáng)性表達(dá);Cygb陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)在部分海馬錐形細(xì)胞胞漿及胞核,主要聚集于核膜和核仁周?chē)?海馬各區(qū)均有表達(dá)。低壓缺氧6h組海馬各區(qū)部分錐形細(xì)胞胞漿出現(xiàn)HIF-1α陽(yáng)性表達(dá);Cygb表達(dá)增加,軸突及樹(shù)突中也出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)。低壓缺氧12h組海馬區(qū)大部分細(xì)胞皺縮變形,胞核固縮或破裂;胞漿及胞核區(qū)均可見(jiàn)HIF-1α陽(yáng)性表達(dá);Cygb表達(dá)進(jìn)一步增加。18 h和24h組HIF-1α和Cygb均高表達(dá);雖然大量錐形細(xì)胞壞死和凋亡,胞核碎裂或溶解,仍可見(jiàn)HIF-1α陽(yáng)性信號(hào)主要集中于胞核區(qū);Cygb在胞核區(qū)和胞漿中表達(dá)均顯著增加。 結(jié)論:1形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),低壓缺氧可造成大鼠腦組織海馬區(qū)錐形細(xì)胞損傷,包括細(xì)胞水腫、壞死、凋亡和Nissl體減少或消失;其損傷程度隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而加重。海馬各區(qū)損傷程度不同,CA1區(qū)對(duì)低壓缺氧最為敏感,損傷最嚴(yán)重;CA2、CA3、CA4區(qū)損傷依次減輕。2低壓缺氧后大鼠腦含水量增加,出現(xiàn)腦水腫,且腦水腫的嚴(yán)重程度隨低壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而加劇。3低壓缺氧造成大鼠腦組織細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。SOD和CAT活性降低而MDA蓄積增加;NOS活性升高導(dǎo)致NO含量顯著增加。4正常時(shí)HIF-1α在海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞中無(wú)表達(dá);低壓缺氧損傷后首先在胞漿出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),隨著低壓缺氧損傷的持續(xù)表達(dá)逐漸增加并出現(xiàn)明顯的胞核聚集趨勢(shì)。提示HIF-1α產(chǎn)生于胞漿,但聚集于胞核內(nèi)作為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合DNA而起效。5正常時(shí)Cygb在海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的胞核、胞漿均有少量表達(dá),主要集中于核膜和核仁周?chē)ｋS著低壓缺氧損傷的持續(xù),Cygb表達(dá)大量增加,其陽(yáng)性信號(hào)遍布胞體和突起中。Cygb在神經(jīng)細(xì)胞胞漿和胞核中均出現(xiàn)表達(dá),并隨減壓缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而表達(dá)增加,提示其不僅作為攜氧球蛋白在胞漿中發(fā)揮作用,可能也作為一種核轉(zhuǎn)錄因子起到基因調(diào)控作用。6低壓缺氧后大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞中HIF-1α和Cygb表達(dá)的分布及時(shí)序性變化特點(diǎn),提示Cygb可能通過(guò)HIF-1α途徑轉(zhuǎn)錄激活,二者關(guān)系密切,共同參與低壓缺氧性腦損傷的保護(hù)。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between hypoxia - inducible factor - 1偽 ( HIF - 1偽 ) and cygb ( Cygb ) in the hippocampus of low - pressure hypoxic brain by establishing a model of low - pressure hypoxic injury in rats , and to explore the relationship between hypoxia - inducible factor - 1偽 ( HIF - 1偽 ) and cygb in the hippocampus of brain tissue .


Methods : 60 adult male SD rats weighing 280 - 320 g were randomly divided into two groups : control group and low - pressure hypoxia 6h , 12h , 18 h and 24h group .


Results : The morphological changes of brain tissue after low - pressure hypoxia injury were the most sensitive to low - pressure hypoxia in CA1 region of hippocampus .


The results showed that the brain water content of each low - pressure hypoxic group gradually increased with the prolongation of the low - pressure hypoxia time , which was significantly different from that of the control group ( P0.01 ) .


Compared with the control group , the content of NO in brain tissue of low - pressure hypoxia group increased significantly ( P0.01 ) . Compared with the control group , the content of NO in brain tissue of low - pressure hypoxia group increased significantly ( P0.01 ) . Compared with the control group , the NO content increased gradually with the prolongation of low - pressure hypoxia time . Compared with the control group , the NO content increased gradually with the prolongation of the low - pressure hypoxia time , except for the low - pressure hypoxia group 6h group , the content of NO in the remaining groups was significantly different from that of the control group ( P0.01 ) .


4 RT - PCR Results :


( 1 ) HIF - 1偽 : HIF - 1偽 was not expressed in the control group , and the expression of HIF - 1偽 in the control group was gradually increased with the prolongation of time .


( 2 ) Cygb : The Cygb expression in the control group was lower than that of the control group . Compared with the control group , the expression of Cygb in the low - pressure hypoxia group was significantly increased ( P0.05 ) and 12h , 18 h and 24h ( P 0.01 ) .


Results : The expression of HIF - 1偽 was observed in the hippocampus , and the expression of HIF - 1偽 was observed in the cytoplasm and nucleus of the hippocampus .


Conclusion : The expression of HIF - 1偽 and Cygb in the hippocampus of rats with low pressure and hypoxia increased . The expression of HIF - 1偽 and Cygb in the hippocampus of rats with low pressure and hypoxia increased significantly . The expression of HIF - 1偽 and Cygb in the hippocampus of the rats with low pressure and hypoxia increased .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R361.2

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本文編號(hào)：1945777