本文選題：胰腺干細胞 + 移植��； 參考：《醫(yī)學綜述》2015年02期

【摘要】：目的探討分離、培養(yǎng)及初步鑒定新生大鼠胰腺干細胞的方法。方法取30只無特定病原體(SPF)級新生大鼠的胰腺組織,用完整胰腺膠原酶消化法分離胰島。以低糖改良Eagel培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液,于不同時期分別添加血清、堿性成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒添加劑、白血病抑制因子、神經(jīng)干細胞原代培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液中的營養(yǎng)因子B27、神經(jīng)元培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液中的營養(yǎng)因子N2等進行培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)學特征及生長特性。應用免疫細胞化學法對培養(yǎng)不同時期的細胞進行巢蛋白(Nestin)及細胞角質(zhì)蛋白19(CK-19)檢測,并進行初步鑒定。結(jié)果 1新生大鼠胰腺內(nèi)纖維組織少,體積小,完整胰腺膠原酶消化法簡化了胰島分離步驟,減少了污染機會,有利于進一步培養(yǎng)。2培養(yǎng)24 h可見細胞貼壁,但貼壁細胞數(shù)量較少,改用無血清培養(yǎng)后,貼壁細胞快速生長,10~15 d形成單層細胞匯集,細胞形態(tài)較一致。3培養(yǎng)所得細胞一直較多表達胰腺干細胞的標志物Nestin,隨培養(yǎng)時間延長,表達CK-19的細胞數(shù)量逐漸增多。結(jié)論新生大鼠胰腺消化后,獲得的細胞于不同時期表達胰腺干細胞的標志物Nestin、CK-19。
[Abstract]:Objective to investigate the method of isolation, culture and identification of pancreatic stem cells in neonatal rats. Methods Pancreatic tissues of 30 neonatal rats without specific pathogen were isolated by collagenase digestion. Serum, basic fibroblast growth factor (bFGF), epidermal growth factor (EGF), insulin-transferrin selenium additive, leukemia inhibitory factor were added in low glucose modified Eagel medium. The nutrition factor B27 in the serum-free culture medium of neural stem cells and N2 in the serum-free culture medium of neuron culture were cultured. The morphological characteristics and growth characteristics were observed under inverted phase contrast microscope. Nestin (Nestin) and CK-19 (cytokeratin 19) were detected by immunocytochemistry and identified preliminarily. Results 1Intrapancreatic fibrous tissue of neonatal rats was small and small. Collagenase digestion of intact pancreas simplified the separation of pancreatic islets, reduced the chance of contamination, and was beneficial to the adherence of visible cells to the cells cultured for 24 h in the further culture of .2 hours. However, the number of adherent cells was relatively small. After serum-free culture, monolayer cells converged after 10 15 days of rapid growth of adherent cells, and Nestin, a marker of pancreatic stem cells, was expressed more frequently in the cells cultured in a consistent form of 3. 3. The expression of Nestin in pancreatic stem cells was increased with the increase of culture time. The number of cells expressing CK-19 increased gradually. Conclusion after pancreatic digestion, Nestinine CK-19, a marker of pancreatic stem cells, was obtained in different stages of pancreatic digestion in neonatal rats.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腫瘤外科;內(nèi)蒙古醫(yī)科大學中心實驗室;
【分類號】：R329.2

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