本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + 生長(zhǎng)因子　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs);并對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β_1(rhTGF-β_1)和胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)誘導(dǎo)MSCs成軟骨分化的能力進(jìn)行一般研究。 材料與方法新西蘭大白兔32只,雄性,月齡4～6月,體重2.5～3.5kg。任選其中一只行雙側(cè)髂骨穿刺抽取骨髓,分離骨髓MSCs,并行體外培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組DMEM培養(yǎng)液中加入rhTGF-β_1和rhIGF-Ⅰ,對(duì)照組中未加入誘導(dǎo)因子。比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的細(xì)胞增殖情況和成軟骨分化情況。制備同種異體脫鈣骨基質(zhì)(DBM)作為支架材料。將體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組MSCs(P_3)負(fù)載到DBM中,構(gòu)建組織工程軟骨復(fù)合體,筋膜包裹后縫合固定到30只兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)行腔內(nèi)培養(yǎng)。分別于植入后4w、8w、12w各取10只標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)切片觀察及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)觀測(cè),并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果實(shí)驗(yàn)組中MSCs集落形成效率(20/10~6)明顯高于對(duì)照組(4/10~6)(u=3.326,P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞爬片做Ⅱ型膠原免疫組化檢測(cè)呈陽(yáng)性,陽(yáng)性細(xì)胞主要集中在細(xì)胞密度高的區(qū)域,胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)棕黃色反應(yīng)物顆粒,對(duì)照組未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。制備得到的同種異體DBM為三維立體多孔結(jié)構(gòu),可塑性好并有適宜的機(jī)械強(qiáng)度。復(fù)合體在腔內(nèi)培養(yǎng)12w后,取出行組織學(xué)切片觀察及Ⅱ型膠原免疫組化觀測(cè):HE染色見(jiàn)大量軟骨細(xì)胞增生,胞核染色呈藍(lán)色;甲苯胺藍(lán)染色見(jiàn)軟骨細(xì)胞成串排列,大量軟骨陷窩形成,周?chē)罅炕|(zhì)包繞;Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)反應(yīng)見(jiàn)細(xì)胞外基質(zhì)中出現(xiàn)大量棕黃色顆粒,Ⅱ型膠原染色強(qiáng)陽(yáng)性。 結(jié)論rhTGF-β_1和rhIGF-Ⅰ可促進(jìn)MSCs增殖和成軟骨分化,MSCs與同種異體DBM結(jié)合后可在關(guān)節(jié)腔內(nèi)成功培養(yǎng)出組織工程軟骨。同種異體DBM符合組織工程軟骨支架材料的基本要求,有望成為一種理想的用于關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的軟骨組織工程支架材料。
[Abstract]:Objective to isolate and culture bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs), and to study the ability of transforming growth factor- 尾 1 rhTGF- 尾 1) and insulin-like growth factor- 鈪，

本文編號(hào)：1917157