本文選題：HIV-1 + 隱性表位��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 艾滋病(AIDS)在世界上流行已經(jīng)將近30年了，到目前為止，人類無論是在治療上還是在預(yù)防上都沒有找到徹底消滅HIV的方法，因此，研究有效的預(yù)防性或治療性疫苗迫在眉睫，用以防止HIV感染以及減少AIDS的發(fā)病。 CD8+T細(xì)胞在HIV感染早期發(fā)揮重要作用，但是由于HIV在壓力選擇下容易發(fā)生突變，可以逃避特異性的CTL反應(yīng)，，而HIV-1 gag、pol序列是其重要的蛋白組成部分，具有相對保守的序列，選擇其中的表位可能突破因高突變導(dǎo)致的免疫清除這一障礙。本研究旨在探索以改造隱性表位為基礎(chǔ)，同時(shí)選擇具有顆粒樣結(jié)構(gòu)的HIV p24蛋白作為外源抗原支架載體系統(tǒng)，依據(jù)其氨基酸序列構(gòu)建HIV復(fù)合多CTL表位基因，制備核酸及蛋白疫苗，免疫轉(zhuǎn)基因動物，激發(fā)特異性CTL反應(yīng)。 傳統(tǒng)上對低親和力表位有一定忽視，修飾低MHC親和力表位可以突破性提高其免疫原性，并且誘導(dǎo)發(fā)生強(qiáng)烈而耐受突變的CD8+T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)，為研制安全有效的HIV預(yù)防/治療性疫苗提供新途徑。 DNA疫苗是含有編碼目的抗原蛋白基因的雙鏈DNA分子(如質(zhì)粒)，將其直接注射到體內(nèi)，可以通過體內(nèi)細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原蛋白誘導(dǎo)相應(yīng)的免疫反應(yīng)。將構(gòu)建的HIV復(fù)合多CTL表位克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，同過轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL-10并擴(kuò)菌，通過大提質(zhì)粒，獲得能夠達(dá)到一定劑量的含有目的基因的DNA疫苗。 將構(gòu)建好的HIV復(fù)合多CTL表位克隆入原核表達(dá)載體pET32a，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21，IPTG誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)有目的蛋白的過表達(dá)，采用包涵體純化的方法對目的蛋白經(jīng)行純化，因?yàn)槭窃谧冃詶l件下純化的蛋白，還需要對蛋白進(jìn)行復(fù)性，以使得蛋白更接近天然狀態(tài)下的活性和結(jié)構(gòu)，這樣就制備了蛋白亞單位疫苗。 本研究選擇的實(shí)驗(yàn)動物為BALA/c小鼠和HHD-2小鼠，按照單一DNA疫苗、單一蛋白疫苗、單一重組腺病毒疫苗(重組腺病毒疫苗由本室李英輝博士構(gòu)建，本文不再贅述)以及復(fù)合疫苗免疫的方案對上述小鼠進(jìn)行免疫。通過檢測抗體以及細(xì)胞因子、細(xì)胞毒等體液和細(xì)胞免疫兩個(gè)方面來分析各種疫苗的免疫效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示HIV復(fù)合多CTL表位疫苗能夠誘導(dǎo)動物體內(nèi)的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答。 本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果為探索新型的抗HIV-1疫苗提供了新依據(jù)。
[Abstract]:AIDS ( AIDS ) has been epidemic in the world for nearly 30 years . So far , human beings have not found a way to completely eradicate HIV , both in treatment and in prevention , so the study of effective preventive or therapeutic vaccines is urgent to prevent HIV infection and reduce the incidence of AIDS .


CD8 + T cells play an important role in the early stage of HIV infection , but HIV - 1 gag and pol sequences are important protein components , and HIV - 1 gag and pol sequences are important protein components . HIV - 1 gag and pol sequences have relatively conserved sequences .


The low affinity epitope is traditionally ignored , and the modified low MHC affinity epitope can improve the immunogenicity and induce a strong and tolerant CD8 + T cell - specific immune response to provide a new path for the development of a safe and effective HIV prevention / therapeutic vaccine .


The DNA vaccine is a double - stranded DNA molecule ( such as a plasmid ) containing an antigen protein gene encoding a target , can be directly injected into the body , and the corresponding immune response can be induced by the expression of the corresponding antigen protein by in vivo cells .


The constructed HIV complex multi - CTL epitope is cloned into a prokaryotic expression vector pET32a , transformed into E . coli BL - 21 , induced by IPTG to find the over - expression of the target protein , and the target protein is purified by inclusion body purification , because the protein is purified under denaturing conditions , and the protein is required to be restored , so that the protein is closer to the activity and the structure in the natural state , so that the protein subunit vaccine is prepared .


BALB / c mice and HHD - 2 mice were immunized with single DNA vaccine , single protein vaccine , single recombinant adenovirus vaccine ( the recombinant adenovirus vaccine was constructed by Dr . Lee Ying - hui , our lab ) . The immune effects of various vaccines were analyzed by detecting antibodies , cytokines , cytotoxic and humoral and cellular immunity . The results suggested that the HIV complex CTL epitope vaccine could induce cellular and humoral immune responses in animals .


The results of this study provide a new basis for exploring new anti - HIV - 1 vaccine .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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本文編號：1837469