本文選題：血管生成素-1 + 間充質(zhì)干細胞��； 參考：《福建醫(yī)科大學》2009年碩士論文

【摘要】： 目的:探討重組人血管生成素-1(Ang-1)能否通過整合素促進大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)粘附和存活、抑制其凋亡,并初步討論其抗凋亡的信號轉(zhuǎn)導機制。 方法:密度梯度離心法結合貼壁分離法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓MSC并通過流式細胞儀檢查表面抗原做鑒定;在24孔培養(yǎng)板上測定不同時間下Ang-1對MSC的粘附作用;臺盼藍染色法和MTT法測定Ang-1對血清饑餓下MSC的活力影響;紫杉醇誘導MSC凋亡后,Hoechst染色法和Annexin V/PI法檢測Ang-1對MSC凋亡的影響,通過Western blot方法檢測磷酸化Akt、總Akt、Bcl-2、β-actin表達水平的變化,結合整合素抗體和信號轉(zhuǎn)導阻滯劑來探討其抗凋亡的可能分子機制。 結果:體外成功分離和培養(yǎng)和擴增了MSC,結合細胞形態(tài)、生長特點和流式細胞儀表面抗原檢測均符合MSC特點,其純度達98.3%。粘附試驗顯示在1d、2d、3d三個不同時間點Ang-1均能顯著促進MSC的粘附(均有P＜0.01),該效應能被EDTA、整合素亞單位β1抗體和RGD多肽所抑制(P＜0.01)。Ang-1能促進血清饑餓下MSC的存活(1d:P＜0.01;2d:P＜0.005)、增殖(P＜0.01)和拮抗紫杉醇誘導的細胞凋亡(P＜0.01),RGD多肽能抑制Ang-1的上述效應。Ang-1組pAkt和Bcl-2表達上調(diào),RGD多肽能抑制二者的表達(P＜0.01),PI-3K/Akt通路傳導阻滯劑Wortmannin僅能抑制pAkt的表達(P＜0.01),對Ang-1作用下的Bcl-2表達上調(diào)無抑制作用(P=0.436)。 結論:密度梯度離心與貼壁分離法相結合可簡單有效地獲得高純度的MSC,Ang-1可與MSC表面的整合素受體結合促進細胞的粘附、存活和增殖,并通過上調(diào)Bcl-2的表達而發(fā)揮抗凋亡作用。RGD多肽能夠抑制Ang-1的抗細胞凋亡保護作用。
[Abstract]:Aim: to investigate whether recombinant human angiopoietin-1 Ang-1) can promote the adhesion and survival of rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) and inhibit its apoptosis through integrin, and discuss its signal transduction mechanism of anti-apoptosis. Methods: rat bone marrow MSC was isolated by density gradient centrifugation combined with adherent separation in vitro and identified by flow cytometry. The adhesion of Ang-1 to MSC was measured on 24 well culture plate. Trypan blue staining and MTT assay were used to detect the effect of Ang-1 on the activity of MSC under serum starvation, the effect of Ang-1 on MSC apoptosis was detected by Hoechst staining and Annexin V/PI method after paclitaxel induced MSC apoptosis, and the changes of phosphorylated Akt2, total Aktbcl-2, 尾 -actin were detected by Western blot method. To explore the possible molecular mechanism of integrin antibody and signal transduction blocker. Results: MSCs were successfully isolated, cultured and amplified in vitro. The cell morphology, growth characteristics and flow cytometry surface antigen detection were all in line with the characteristics of MSC, and the purity was 98.33%. The adhesion test showed that Ang-1 could significantly promote the adhesion of MSC at three different time points (all P < 0.01). This effect could be inhibited by EDTA, integrin subunit 尾 _ 1 antibody and RGD polypeptide. P < 0.01).Ang-1 could promote the survival of MSC under serum starvation on 1 day, P < 0.012 days, P < 0.005, proliferation P < 0.01), and could promote the survival of MSC at different time points (P < 0.012, P < 0.005, P < 0.01), and the effect could be inhibited by EDTA, integrin subunit 尾 _ 1 antibody and RGD polypeptide (P < 0.01). Antagonism to apoptosis induced by paclitaxel (P < 0.01). Ang-1 can inhibit the above effects of Ang-1. In Ang-1 group, the up-regulation of pAkt and Bcl-2 expression can inhibit the expression of PI-3K / Akt pathway conduction blocker Wortmannin can only inhibit the expression of pAkt (P < 0.01). There was no inhibitory effect on the upregulation. Conclusion: the combination of density gradient centrifugation and adherent separation can be used to obtain the high purity of MSCG Ang-1, which can bind to the integrin receptor on the surface of MSC to promote cell adhesion, survival and proliferation. By up-regulating the expression of Bcl-2, the anti-apoptosis effect. RGD peptide can inhibit the anti-apoptotic protective effect of Ang-1.
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R363

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 吳玉卓;陳紅;;臍血間充質(zhì)干細胞體外誘導成肝細胞的研究進展[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年02期

2 隆玄;吳曉丹;施勁東;李善群;;間充質(zhì)干細胞在急性肺損傷中的應用進展[J];中國臨床醫(yī)學;2011年03期

3 楊光忠;陳文明;;間充質(zhì)干細胞的免疫調(diào)節(jié)功能[J];臨床合理用藥雜志;2011年31期

4 王燕茹;張育;;間充質(zhì)干細胞與類風濕關節(jié)炎[J];實用醫(yī)學雜志;2011年16期

5 馮德鵬;李雪莉;范炎;;臍血間充質(zhì)干細胞的研究進展[J];國際老年醫(yī)學雜志;2010年05期

6 程慶;白志明;;間充質(zhì)干細胞歸巢的研究進展[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2011年09期

7 傅強;;他達拉非可對干細胞產(chǎn)生持久而穩(wěn)定的保護作用[J];中華男科學雜志;2011年08期

8 瞿海龍;麻曉靜;張冰;梁璐;;基因修飾的間充質(zhì)干細胞在急性心肌梗死中的應用前景[J];中西醫(yī)結合心腦血管病雜志;2011年07期

9 郭玲玲;李明;邢爽;羅慶良;;間充質(zhì)干細胞治療重癥急性放射病研究的新進展[J];中國實驗血液學雜志;2011年03期

10 禹亞彬;儲建;章世海;卞建民;;間充質(zhì)干細胞體外分化為胰島β細胞的影響因素的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2011年17期

相關會議論文 前10條

1 王巧稚;韓藝;趙宏賢;余鴻;劉廣益;;當歸誘導人脂肪間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞分化和毒性檢測的研究[A];中國解剖學會第十一屆全國組織學與胚胎學青年學術研討會論文匯編[C];2009年

2 王玉紅;陳光輝;;地黃低聚糖對人脂肪組織源性間充質(zhì)干細胞分泌肝細胞生長因子的影響[A];2010全國中西醫(yī)結合危重病、急救醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2010年

3 杜鳳移;王皓;楊樹龍;趙繪存;楊英;楊軍;;納米纖維支架對大鼠間充質(zhì)干細胞向肝細胞分化的影響[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第29屆學術年會暨首屆生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2009年

4 郭勇;張西正;郭春;魏嚴;李瑞欣;徐曉瑩;張永紅;;脂肪間充質(zhì)干細胞向心肌細胞分化中心肌發(fā)育相關基因的表達[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2008年年會暨首屆生物醫(yī)學工程與臨床論壇論文集[C];2008年

5 朱恒;江小霞;劉元林;張毅;毛寧;;間充質(zhì)干細胞選擇性調(diào)節(jié)破骨細胞發(fā)育和功能[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

6 張顥;陶艷玲;邱林;張伯龍;馬軍;陳志哲;劉擁軍;韓忠朝;;一種具有免疫負調(diào)節(jié)功能的人臍帶源間充質(zhì)干細胞[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

7 楊少光;池穎;戎麗娟;邢文;盧士紅;趙欽軍;馬鳳霞;韓忠朝;;不同來源間充質(zhì)干細胞誘導分化成血管內(nèi)皮細胞的比較[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

8 李杰平;孔佩艷;李佳麗;朱麗丹;孔祥敬;曾東風;劉紅;王慶余;彭賢貴;陳幸華;張曦;;純化的自體CD34+細胞聯(lián)合間充質(zhì)干細胞治療難治性克隆恩病一例并文獻復習[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

9 羅高興;程文廣;黃正根;賀偉峰;袁順宗;陳希煒;吳軍;;應用人臍帶血間充質(zhì)干細胞修復小鼠皮膚缺損創(chuàng)面的實驗研究[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

10 郭振興;鄭翠玲;陳振萍;董文川;楊仁池;;胚胎骨髓來源的間充質(zhì)干細胞對人Th17細胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 王秋月　王琳;空軍總醫(yī)院采用間充質(zhì)干細胞救治小腦萎縮[N];科技日報;2009年

2 記者 李素鋒;我市首例間充質(zhì)干細胞移植手術取得成功[N];臨汾日報;2009年

3 記者 王丹　通訊員 艾素;異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良治療獲突破[N];健康報;2010年

4 記者 白毅;間充質(zhì)干細胞可促進成熟樹突狀細胞增殖分化[N];中國醫(yī)藥報;2009年

5 張泓;生物醫(yī)藥,2008新突破[N];北方經(jīng)濟時報;2008年

6 徐機玲;姜躍進;我國骨髓干細胞移植技術獲突破[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 本報記者 楊陽騰;北科生物：讓干細胞創(chuàng)造醫(yī)學奇跡[N];經(jīng)濟日報;2011年

8 時報記者 楊曉帆;韓忠朝:中國干細胞研究領軍者[N];濱海時報;2010年

9 張獻懷 王志紅;抗排異反應有了新辦法[N];保健時報;2009年

10 徐機玲 姜躍進;骨髓干細胞移植我國實現(xiàn)新突破[N];新華每日電訊;2003年

相關博士學位論文 前10條

1 彭飛;620nm非相干紅光對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的光生物調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學;2011年

2 于美嬌;系統(tǒng)歸巢的間充質(zhì)干細胞在牙周組織修復再生過程中的作用研究[D];山東大學;2011年

3 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細胞促進創(chuàng)面愈合及體外誘導分化為表皮樣細胞的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2011年

4 李寶軍;脂肪間充質(zhì)干細胞體外誘導及復合PLGA體內(nèi)異位成軟骨的實驗研究[D];中南大學;2007年

5 朱雅姝;Flk-1~+間充質(zhì)干細胞對腫瘤細胞增殖的抑制作用及其分子機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

6 吳桂珠;脂肪間充質(zhì)干細胞治療壓力性尿失禁的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2010年

7 熊卉;轉(zhuǎn)化生長因子β1基因體外轉(zhuǎn)染兔顳下頜關節(jié)滑膜間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨轉(zhuǎn)化實驗研究[D];武漢大學;2010年

8 苗宗寧;胎盤間充質(zhì)干細胞與絲素蛋白/羥基磷灰石材料在骨創(chuàng)傷修復中的實驗研究[D];蘇州大學;2010年

9 梁偉;人骨髓Flk-1~+間充質(zhì)干細胞抗DNA損傷物質(zhì)影響作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

10 趙迎澤;BMP9通過MAPKs通路調(diào)控間充質(zhì)干細胞成骨分化及其機制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

相關碩士學位論文 前10條

1 章守琴;人羊膜間充質(zhì)干細胞支持造血的體外研究[D];昆明醫(yī)學院;2010年

2 陳芳;臍帶間充質(zhì)干細胞修復化療所致卵巢顆粒細胞損傷的體外實驗[D];暨南大學;2010年

3 張茜真;人臍帶間充質(zhì)干細胞的分離、鑒定以及干細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子誘導其重編程的研究[D];浙江理工大學;2010年

4 陳義;臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)及體外重建角膜后板層的初步研究[D];暨南大學;2010年

5 唐子濱;納米級膠原基骨材料復合自體脂肪間充質(zhì)干細胞用于兔后外側(cè)脊柱融合的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

6 齊凱;人臍帶來源間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化初探[D];山西醫(yī)科大學;2011年

7 馬蘭蘭;不同胎齡人臍帶血間充質(zhì)干細胞的研究[D];中國醫(yī)科大學;2010年

8 李成華;口腔黏膜間充質(zhì)干細胞存在及在口腔扁平苔蘚中變化的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

9 田毅;人臍帶Wharton's jelly間充質(zhì)干細胞的生物學特性以及其與腦腫瘤干細胞共培養(yǎng)的實驗研究[D];鄭州大學;2010年

10 張福麗;間充質(zhì)干細胞治療肺動脈高壓研究進展（附肺動脈高壓發(fā)病機制進展）[D];山西醫(yī)科大學;2011年

，

本文編號：1822892