發(fā)布時間：2018-04-25 12:33

  本文選題：LAIR-1 + LAIR-2��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2008年博士論文

【摘要】： 白細胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體(Leukocyte associated immunoglobulinlike-receptor,LAIR)屬于免疫球蛋白超家族成員。它是1983年用大顆粒淋巴細胞免疫小鼠,制備對NK細胞殺傷有抑制作用的抗體時發(fā)現(xiàn)的。人LAIR家族包含LAIR-1和LAIR-2兩個成員。在第八屆人類白細胞分化抗原會議上分別被命名為CD305及CD306。人LAIR基因位于人19號染色體(19q13.42)上被稱為白細胞免疫球蛋白樣受體復(fù)合體(Leukocyte Ig-likereceptor complex,LRC)中。LAIR-1和LAIR-2基因轉(zhuǎn)錄方向相反。LAIR-1cDNA全長1728bp,有4個不同的異型。人LAIR-1是一個含有287個氨基酸的Ⅰ型跨膜糖蛋白,胞膜外區(qū)有一個Ig樣結(jié)構(gòu)域,胞漿區(qū)含有兩個免疫受體酪氨酸抑制性模體(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs,ITIMs)。LAIR-2基因編碼的蛋白質(zhì)與LAIR-1胞膜外區(qū)有近84%的同源性,含有135個氨基酸,沒有跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)結(jié)構(gòu)域,為一種分泌蛋白,LAIR-2有3個不同的異型。編碼小鼠LAIR-1(mLAIR-1)的基因位于小鼠7號染色體的最末端,相當于人的LRC所處的19q13.42區(qū)域。人LAIR-1與LAIR-2有相似的表達特點,主要表達于造血細胞。用抗體交聯(lián)人LAIR-1,其胞漿區(qū)可募集酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2,轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制性信號,抑制細胞功能。小鼠LAIR-1與人LAIR-1有相似的結(jié)構(gòu)特征,在氨基酸水平有40%的同源性。它也廣泛表達于各種免疫細胞,介導(dǎo)抑制性功能。特異性抗體交聯(lián)小鼠LAIR-1,胞漿區(qū)ITIM被磷酸化后可募集SHP-2,但不募集SHP-1。 2006年,Mayaard研究小組首次發(fā)現(xiàn)了膠原是人LAIR-1的功能性高親和力配體。它們之間的相互作用依賴于保守的甘氨酸-脯氨酸-羥脯氨酸的膠原重復(fù)序列。最近,他們又在體外實驗中發(fā)現(xiàn)LAIR-2與LAIR-1有相同的膠原結(jié)合位點,LAIR-2能夠以高親和力結(jié)合膠原,并可阻斷LAIR-1與膠原的結(jié)合。小鼠LAIR-1可以高親和力結(jié)合多種型別的膠原分子,同樣,mLAIR-1與配體的相互作用也依賴于保守的甘氨酸-脯氨酸-羥脯氨酸的膠原重復(fù)序列。 LAIR-1與膠原之間的相互作用可受到可溶型分子的調(diào)控。sLAIR-1及LAIR-2分子可以阻斷膜型LAIR-1與膜型或細胞外基質(zhì)中的膠原分子結(jié)合。而且LAIR-2與膠原的親和力要遠遠大于sLAIR-1與膠原結(jié)合的親和力,因此,在體內(nèi)LAIR-2很可能作為人膜型LAIR-1受體的競爭分子,從而調(diào)節(jié)LAIR-1的抑制活性。 本研究中首先構(gòu)建了pIg%q3C-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2真核表達載體,轉(zhuǎn)染CHO細胞,經(jīng)克隆化篩選建立了穩(wěn)定表達LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全長分子的細胞株。利用Protein A親和層析柱及LAIR-2單克隆抗體交聯(lián)的親和層析柱,從細胞培養(yǎng)上清中分別純化到LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全長分子。為夾心ELISA檢測人標本準備了標準品蛋白。利用流式細胞術(shù)及免疫細胞化學(xué)技術(shù)鑒定了表達的LAIR-2蛋白分子與原核表達LAIR-2抗原制備的單克隆抗體具有良好的結(jié)合活性。 應(yīng)用優(yōu)化的ELISA試劑盒,發(fā)現(xiàn)炎癥病人的血清中可溶型LAIR分子水平高于正常人。孕婦的血清和尿中LAIR-2水平以及尿中的sLAIR-1水平高于對照組。對比實驗發(fā)現(xiàn),sLAIR-1和LAIR-2之間以及LAIR分子在血清中及尿中的水平都呈正相關(guān)。利用免疫組織化學(xué)技術(shù),我們用LAIR-1-Fc融合蛋白及LAIR-2-Fc融合蛋白在胎盤組織切片中進行了染色,發(fā)現(xiàn)LAIR-2以高親力結(jié)合胎盤組織基底膜,提示LAIR-2與sLAIR-1一起可能通過與膜型LAIR-1競爭相同的配體來調(diào)節(jié)LAIR-1的免疫抑制功能。 應(yīng)用免疫組織化學(xué)及激光共聚焦顯微鏡技術(shù),我們研究了非造血組織中LAIR-1的表達。發(fā)現(xiàn)LAIR-1在中樞神經(jīng)系統(tǒng)有選擇性表達,而且在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中LAIR-1與小膠質(zhì)細胞標志分子共表達于同一種細胞,同時發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中,小膠質(zhì)細胞的LAIR-1表達水平明顯增高。 Toll樣受體是參與固有免疫應(yīng)答抵抗病原微生物并誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的重要分子。TLR4是識別細菌LPS,介導(dǎo)抗菌炎癥反應(yīng)的重要分子。它高表達于單核/巨噬細胞、肥大細胞、中性粒細胞以及腸道上皮細胞、內(nèi)皮細胞等。過高水平的LPS在體內(nèi)可誘導(dǎo)嚴重的炎癥反應(yīng),甚至發(fā)生敗血癥性休克。目前,對于TLR4介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及生理病理反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用十分關(guān)注。為了弄清共表達于單核巨噬細胞表面的LAIR-1與TLR4在功能上的相互關(guān)系,我們對LAIR-1調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)DC細胞產(chǎn)生促炎細胞因子進行了研究。我們首先制備了3株大鼠抗小鼠LAIR-1單克隆抗體并進行了初步鑒定,發(fā)現(xiàn)3株抗體中的FMU-mLAIR-1.2可以用于Western blot、流式細胞術(shù)分析及免疫細胞化學(xué)研究。進一步實驗中發(fā)現(xiàn)用固相化的FMU-mLAIR-1.2抗體交聯(lián)小鼠樹突狀細胞系DC2.4細胞表面的LAIR-1分子可引起IL-6和TNF-α等促炎細胞因子分泌水平增加。我們提出的設(shè)想是:LAIR-1交聯(lián)后募集的酪氨酸磷酸酶可能抑制了某種可抑制TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號分子的活性;或者是促進了TLR4信號通路中的某個分子,從而促進了促炎細胞因子的分泌。
[Abstract]:LAIR - 1 and LAIR - 2 genes were named CD305 and CD306 . The human LAIR family was named CD305 and CD306 . The human LAIR - 1 was a type 鈪，

本文編號：1801349