發(fā)布時間：2018-04-16 02:10

  本文選題：人乳頭瘤病毒 + 核糖核蛋白��； 參考：《廈門大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 流行病學(xué)和相關(guān)研究證實(shí)人乳頭瘤病毒(HPV)感染與尖銳濕疣、[鄙掀ち鲅鏨凸卑┑姆⑸叵得芮�。HPV感染機(jī)體后各種病毒基因的表達(dá)是受嚴(yán)格調(diào)控的,尤其是晚期基因,在未分化的細(xì)胞中幾乎不表達(dá),隨著細(xì)胞分裂,病毒基因組隨子細(xì)胞上移到表皮上層后,晚期蛋白的表達(dá)才被啟動。這種分化依賴的晚期蛋白表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚不明確。 在以往的研究中發(fā)現(xiàn),晚期蛋白在轉(zhuǎn)錄后水平受多種負(fù)調(diào)節(jié)元件的控制,其中早期多聚腺苷酸化信號(pAE)在晚期基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中起到核心的作用,它能使mRNA的轉(zhuǎn)錄提前終止,在HPV16 L2的N端有一個GU含量豐富的序列(GU-rich sequence,GRS),是hnRNP H1蛋白結(jié)合位點(diǎn),能夠增強(qiáng)pAE的活性,進(jìn)一步抑制晚期蛋白的表達(dá)。hnRNPH1在細(xì)胞中的分布水平有隨著細(xì)胞的分化而降低的特點(diǎn),晚期蛋白表達(dá)的組織特異性很可能與hnRNP H1的表達(dá)有關(guān)。 我們用免疫共沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)hnRNP H1與HPV16 L1蛋白有相互作用,并證實(shí)這種相互作用是天然狀態(tài)下存在的。我們構(gòu)建了一個模擬HPV轉(zhuǎn)錄調(diào)控的質(zhì)粒模型(pGPG),用兩個GFP分別代替早期基因和晚期基因,中間加以pAE和下游的GRS序列。通過檢測下游的GFP(G2)的RNA以及蛋白質(zhì)的表達(dá),來反映hnRNP H1蛋白及L1對晚期蛋白轉(zhuǎn)錄翻譯的影響。在293F了細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pGPG質(zhì)粒,幾乎檢測不到G2的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,蛋白表達(dá)量也很低,沉默hnRNP H1基因后,G2的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)量大大提高,印證了hnRNP H1對晚期蛋白的轉(zhuǎn)錄抑制效應(yīng)起重要作用。我們首次發(fā)現(xiàn):HPV16 L1的表達(dá)能夠有效地提高G2的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平,在HeLa和Huh7等細(xì)胞上也發(fā)現(xiàn)相同的現(xiàn)象,將hnRNP H1沉默后再轉(zhuǎn)染HPV16 L1質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)在沒有H1的情況下,L1對G2的表達(dá)沒有額外的刺激效應(yīng)。提示HPV16 L1對晚期蛋白表達(dá)的提高可能是通過L1與hnRNPH1結(jié)合,抑制了hnRNP H1的功能來實(shí)現(xiàn)的。在病毒的感染過程中,L1蛋白很可能參與了晚期基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,對自身的表達(dá)有正協(xié)同的效應(yīng)。L1與hnRNPH1相互阻遏,hnRNP H1表達(dá)過高時L1的表達(dá)被抑制,在分化的細(xì)胞中hnRNPH1的表達(dá)量降低,pAE活性不高,晚期基因可以通讀、表達(dá),隨著L1蛋白表達(dá)量增多并結(jié)合到hnRNP H1上,hnRNP H1失活,最終L1蛋白得以大量表達(dá),啟動病毒成熟的后續(xù)過程。本文章為更進(jìn)一步揭示HPV晚期蛋白的表達(dá)和病毒生活周期的調(diào)控規(guī)律提供了一些思路,為HPV引發(fā)的多種疾病的致病機(jī)理提供理論支持,并為相關(guān)治療藥物的研發(fā)提供有利的啟示。
[Abstract]:Human papillomavirus (HPV) infection and condyloma acuminatum are confirmed by epidemiology and related studies.Wahoo?Chisel?Convex?Perem 5?The expression of various viral genes is strictly regulated, especially the late genes, which are hardly expressed in undifferentiated cells. As the cells divide, the virus genome moves up to the upper epidermis with the daughter cells.Late protein expression was only activated.The regulatory mechanism of this differentiation dependent late protein expression is unclear.In previous studies, it has been found that advanced proteins are controlled by many negative regulatory elements at the post-transcriptional level, among which the early polyadenylation signal (PAE) plays a central role in the post-transcriptional regulation of advanced genes, which can lead to early termination of mRNA transcription.In the N terminal of HPV16 L2, there is a GU-rich sequence of GU-rich sequence GRSs, which is a binding site of hnRNP H1 protein, which can enhance the activity of pAE and further inhibit the expression of late protein .hnRNPH1.The tissue specificity of late protein expression may be related to the expression of hnRNP H 1.The interaction between hnRNP H1 and HPV16 L1 protein was found by immunoprecipitation technique, and it was confirmed that this interaction exists in natural state.We constructed a plasmid model to mimic the transcriptional regulation of HPV. Two GFP were used to replace the early gene and the late gene, respectively, with pAE and downstream GRS sequences.The effect of hnRNP H1 and L1 on the transcriptional translation of advanced proteins was studied by detecting the expression of RNA and protein in the downstream GFP G2).After transfection of pGPG plasmid into 293F cells, the transcription product of G2 was hardly detected, and the protein expression was very low. After silencing hnRNP H1 gene, the transcription and expression of hnRNP H1 was greatly increased, which confirmed that hnRNP H1 played an important role in the transcriptional inhibition of late protein.We found for the first time that the expression of 1: HPV16 L1 could effectively improve the transcription and protein expression of G2. The same phenomenon was found in HeLa and Huh7 cells. HnRNP H1 was silenced and then transfected into HPV16 L1 plasmid.It was found that the expression of G _ 2 was not stimulated by L _ 1 without H _ 1.The results suggest that the increase of HPV16 L1 protein expression may be due to the binding of L1 to hnRNPH1, which inhibits the function of hnRNP H1.In the process of virus infection, it is possible that the L1 protein is involved in the post-transcriptional regulation of late gene, and the positive synergistic effect of the expression of L1 on itself. L1 interacts with hnRNPH1 to suppress the expression of hnRNP H1 when the expression of H1 is too high, and the expression of L1 is inhibited when it is overexpressed.The expression of hnRNPH1 in differentiated cells was not high and the late stage genes could be read and expressed. With the increase of L1 protein expression and the inactivation of hnRNP H1, L1 protein could be expressed in large quantities.Initiate the subsequent process of virus maturation.This article provides some ideas for further revealing the expression of late HPV protein and the regulation of virus life cycle, and provides theoretical support for the pathogenesis of many diseases caused by HPV.And provide beneficial enlightenment for the research and development of related therapeutic drugs.
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R373

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于修平，卞繼峰;人乳頭瘤病毒研究的新進(jìn)展[J];中國病毒學(xué);1996年04期

2 杜江,邱慶林,梁巧明,彭冬先,孫錦程,吳妙靈;247例人乳頭瘤病毒的PCR檢測結(jié)果分析[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1998年02期

3 曾三武;人乳頭瘤病毒分子生物學(xué)及相關(guān)疫苗的研究[J];口岸衛(wèi)生控制;2001年04期

4 胡榮欣;高謙;;人乳頭瘤病毒疫苗的研究策略及最新進(jìn)展[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué)、醫(yī)學(xué)版);2005年04期

5 王敏;王方金;吳健;王偉毅;何蘊(yùn)韶;;低密度基因芯片技術(shù)檢測人乳頭瘤病毒基因型[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年04期

6 伍欣星,趙灃,丁曉華,邱小萍,譚云,戴天力,趙文先;人乳頭瘤病毒(地方株)16型E7蛋白的抗原性和免疫原性研究[J];免疫學(xué)雜志;1998年02期

7 潘巍巍;賴國旗;宋方洲;易發(fā)平;馬永平;左國偉;;構(gòu)建人乳頭瘤病毒關(guān)鍵基因的原核重組載體[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2006年21期

8 劉立鴻;汪凱;張富春;馬正海;;人乳頭瘤病毒(HPV)致癌機(jī)制研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2008年02期

9 董菁，莊堅，余秀葵，林瑩，，謝斌;人乳頭瘤病毒DNA的PCR檢測[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1995年02期

10 宋長芹,于修平,欒怡,卞繼峰,趙蔚明,賈繼輝,王津秋,閻淑芳;小鼠對HPV_(16)L1-E7重組腺病毒和重組質(zhì)粒的免疫應(yīng)答[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2003年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 湯曉飛;歐陽喈;高木實(shí);;成釉細(xì)胞瘤中人乳頭瘤病毒HPV16和HPV18感染的檢測[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會第七屆全國口腔病理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2006年

2 胡越;凌志強(qiáng);劉洋;朱雪瓊;;人乳頭瘤病毒感染狀態(tài)原發(fā)性宮頸癌細(xì)胞染色體DNA拷貝數(shù)變化特征[A];第四屆長三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 張慧敏;章曉鷹;潘祥龍;徐平;;SYBR Green實(shí)時熒光PCR方法在檢測廣譜人乳頭瘤病毒中的應(yīng)用[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 張慧敏;章曉鷹;潘祥龍;徐平;;SYBR Green實(shí)時熒光PCR方法在檢測廣譜人乳頭瘤病毒中的應(yīng)用[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

5 楊建林;柳長柏;李丹莉;;人乳頭瘤病毒16型E2融合鈣網(wǎng)蛋白抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

6 王建捷;靳家玉;馮玲;郝薇;張玲;;人乳頭瘤病毒負(fù)荷量與宮頸病變關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 鄒媛;郭興中;方國偉;;1184例男性人乳頭瘤病毒分型檢測結(jié)果分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

8 朱明昭;;人乳頭瘤病毒相關(guān)疾病的預(yù)防及治療性疫苗研究進(jìn)展[A];中國生物工程學(xué)會第三次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2001年

9 沈云岳;劉華;王蕾;高鋒;;高危型人乳頭瘤病毒檢測方法的評估[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

10 劉方;王家璧;劉躍華;左亞剛;王惠珍;蔓小紅;;間接免疫熒光技術(shù)檢測尖銳濕疣中的人乳頭瘤病毒[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科主任醫(yī)師 譚先杰;人乳頭瘤病毒的自述[N];健康時報;2010年

2 黃冰;人乳頭瘤病毒毒在哪里？[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

3 北京地壇醫(yī)院感染中心副主任醫(yī)師 劉彥春;人乳頭瘤病毒防治新篇[N];健康報;2010年

4 張中橋;肺鱗癌與人乳頭瘤病毒有關(guān)[N];健康報;2006年

5 張中橋;肺鱗癌與人乳頭瘤病毒感染有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

6 記者 鄭莉麗;實(shí)時分子檢測人乳頭瘤病毒在歐洲推出[N];健康報;2009年

7 衣曉峰;宮頸癌年輕化人乳頭瘤病毒是禍?zhǔn)譡N];大眾衛(wèi)生報;2004年

8 李天舒;西藏 女性人乳頭瘤病毒感染率低于全國水平[N];健康報;2008年

9 記者 王丹;高危型人乳頭瘤病毒DNA檢測可用于宮頸癌初篩[N];健康報;2010年

10 劉志剛;常見性病的認(rèn)識和預(yù)防[N];家庭醫(yī)生報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 梁思;人乳頭瘤病毒相關(guān)皮膚病發(fā)病機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

2 米霞;尖銳濕疣患者宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染情況的調(diào)查及人乳頭瘤病毒臨床和亞臨床感染治療的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 李淑英;人乳頭瘤病毒和EB病毒感染與上消化道腫瘤相關(guān)性研究[D];河北大學(xué);2010年

4 繆若羽;細(xì)支氣管肺泡癌的分子生物學(xué)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

5 趙蔚明;低危型人乳頭瘤病毒優(yōu)化密碼E7基因的研究[D];山東大學(xué);2004年

6 李遠(yuǎn)宏;人乳頭瘤病毒在某些皮膚病中的檢測[D];中國醫(yī)科大學(xué);2001年

7 徐道華;基于CTL表位的宮頸癌治療性多肽疫苗的分子設(shè)計、合成及免疫學(xué)效應(yīng)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

8 邱愛東;四川地區(qū)宮頸癌患者組織中高危型人乳頭瘤病毒的分子流行病學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2006年

9 楊怡卓;西多福韋對人乳頭瘤病毒感染的宮頸癌細(xì)胞生長抑制作用的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

10 張魏芳;高危型人乳頭瘤病毒早期蛋白E6和E7調(diào)控細(xì)胞周期的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 邵為榮;重組人干擾素α2b陰道泡騰片對宮頸糜爛治療的相關(guān)病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2006年

2 盧五迅;人乳頭瘤病毒假病毒中和模型的建立和應(yīng)用[D];廈門大學(xué);2006年

3 逯克娜;北京地區(qū)婦女對HPV病毒與宮頸病變認(rèn)知程度的調(diào)查研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2008年

4 李博;人乳頭瘤病毒16 E6蛋白與人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶在乳腺癌中的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

5 高玉華;高危型HPV檢測在提高宮頸癌前病變及宮頸癌篩查陽性率的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

6 李公祥;熒光定量PCR檢測HPVDNA與宮頸癌的相關(guān)研究[D];青島大學(xué);2005年

7 毛靜月;焦磷酸測序技術(shù)在高危型HPV分型中應(yīng)用的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 王彤;人乳頭瘤病毒檢測在宮頸癌篩查中的應(yīng)用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

9 李菁菁;人乳頭瘤病毒16型E2基因的克隆、表達(dá)及鑒定[D];新疆大學(xué);2008年

10 鄭舟;人乳頭瘤病毒假病毒制備方法的優(yōu)化以及高通量中和實(shí)驗(yàn)檢測系統(tǒng)的建立[D];廈門大學(xué);2008年

本文編號：1756830