本文選題：人乳頭瘤病毒 + 核糖核蛋白��； 參考：《廈門大學》2008年碩士論文

【摘要】： 流行病學和相關研究證實人乳頭瘤病毒(HPV)感染與尖銳濕疣、[鄙掀ち鲅鏨凸卑┑姆⑸叵得芮�。HPV感染機體后各種病毒基因的表達是受嚴格調控的,尤其是晚期基因,在未分化的細胞中幾乎不表達,隨著細胞分裂,病毒基因組隨子細胞上移到表皮上層后,晚期蛋白的表達才被啟動。這種分化依賴的晚期蛋白表達調控機制尚不明確。 在以往的研究中發(fā)現(xiàn),晚期蛋白在轉錄后水平受多種負調節(jié)元件的控制,其中早期多聚腺苷酸化信號(pAE)在晚期基因的轉錄后調控中起到核心的作用,它能使mRNA的轉錄提前終止,在HPV16 L2的N端有一個GU含量豐富的序列(GU-rich sequence,GRS),是hnRNP H1蛋白結合位點,能夠增強pAE的活性,進一步抑制晚期蛋白的表達。hnRNPH1在細胞中的分布水平有隨著細胞的分化而降低的特點,晚期蛋白表達的組織特異性很可能與hnRNP H1的表達有關。 我們用免疫共沉淀技術發(fā)現(xiàn)hnRNP H1與HPV16 L1蛋白有相互作用,并證實這種相互作用是天然狀態(tài)下存在的。我們構建了一個模擬HPV轉錄調控的質粒模型(pGPG),用兩個GFP分別代替早期基因和晚期基因,中間加以pAE和下游的GRS序列。通過檢測下游的GFP(G2)的RNA以及蛋白質的表達,來反映hnRNP H1蛋白及L1對晚期蛋白轉錄翻譯的影響。在293F了細胞中轉染pGPG質粒,幾乎檢測不到G2的轉錄產(chǎn)物,蛋白表達量也很低,沉默hnRNP H1基因后,G2的轉錄和表達量大大提高,印證了hnRNP H1對晚期蛋白的轉錄抑制效應起重要作用。我們首次發(fā)現(xiàn):HPV16 L1的表達能夠有效地提高G2的轉錄和蛋白表達水平,在HeLa和Huh7等細胞上也發(fā)現(xiàn)相同的現(xiàn)象,將hnRNP H1沉默后再轉染HPV16 L1質粒,發(fā)現(xiàn)在沒有H1的情況下,L1對G2的表達沒有額外的刺激效應。提示HPV16 L1對晚期蛋白表達的提高可能是通過L1與hnRNPH1結合,抑制了hnRNP H1的功能來實現(xiàn)的。在病毒的感染過程中,L1蛋白很可能參與了晚期基因的轉錄后調控,對自身的表達有正協(xié)同的效應。L1與hnRNPH1相互阻遏,hnRNP H1表達過高時L1的表達被抑制,在分化的細胞中hnRNPH1的表達量降低,pAE活性不高,晚期基因可以通讀、表達,隨著L1蛋白表達量增多并結合到hnRNP H1上,hnRNP H1失活,最終L1蛋白得以大量表達,啟動病毒成熟的后續(xù)過程。本文章為更進一步揭示HPV晚期蛋白的表達和病毒生活周期的調控規(guī)律提供了一些思路,為HPV引發(fā)的多種疾病的致病機理提供理論支持,并為相關治療藥物的研發(fā)提供有利的啟示。
[Abstract]:Human papillomavirus (HPV) infection and condyloma acuminatum are confirmed by epidemiology and related studies.Wahoo?Chisel?Convex?Perem 5?The expression of various viral genes is strictly regulated, especially the late genes, which are hardly expressed in undifferentiated cells. As the cells divide, the virus genome moves up to the upper epidermis with the daughter cells.Late protein expression was only activated.The regulatory mechanism of this differentiation dependent late protein expression is unclear.In previous studies, it has been found that advanced proteins are controlled by many negative regulatory elements at the post-transcriptional level, among which the early polyadenylation signal (PAE) plays a central role in the post-transcriptional regulation of advanced genes, which can lead to early termination of mRNA transcription.In the N terminal of HPV16 L2, there is a GU-rich sequence of GU-rich sequence GRSs, which is a binding site of hnRNP H1 protein, which can enhance the activity of pAE and further inhibit the expression of late protein .hnRNPH1.The tissue specificity of late protein expression may be related to the expression of hnRNP H 1.The interaction between hnRNP H1 and HPV16 L1 protein was found by immunoprecipitation technique, and it was confirmed that this interaction exists in natural state.We constructed a plasmid model to mimic the transcriptional regulation of HPV. Two GFP were used to replace the early gene and the late gene, respectively, with pAE and downstream GRS sequences.The effect of hnRNP H1 and L1 on the transcriptional translation of advanced proteins was studied by detecting the expression of RNA and protein in the downstream GFP G2).After transfection of pGPG plasmid into 293F cells, the transcription product of G2 was hardly detected, and the protein expression was very low. After silencing hnRNP H1 gene, the transcription and expression of hnRNP H1 was greatly increased, which confirmed that hnRNP H1 played an important role in the transcriptional inhibition of late protein.We found for the first time that the expression of 1: HPV16 L1 could effectively improve the transcription and protein expression of G2. The same phenomenon was found in HeLa and Huh7 cells. HnRNP H1 was silenced and then transfected into HPV16 L1 plasmid.It was found that the expression of G _ 2 was not stimulated by L _ 1 without H _ 1.The results suggest that the increase of HPV16 L1 protein expression may be due to the binding of L1 to hnRNPH1, which inhibits the function of hnRNP H1.In the process of virus infection, it is possible that the L1 protein is involved in the post-transcriptional regulation of late gene, and the positive synergistic effect of the expression of L1 on itself. L1 interacts with hnRNPH1 to suppress the expression of hnRNP H1 when the expression of H1 is too high, and the expression of L1 is inhibited when it is overexpressed.The expression of hnRNPH1 in differentiated cells was not high and the late stage genes could be read and expressed. With the increase of L1 protein expression and the inactivation of hnRNP H1, L1 protein could be expressed in large quantities.Initiate the subsequent process of virus maturation.This article provides some ideas for further revealing the expression of late HPV protein and the regulation of virus life cycle, and provides theoretical support for the pathogenesis of many diseases caused by HPV.And provide beneficial enlightenment for the research and development of related therapeutic drugs.
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R373

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