本文選題：離子霉素 + Jurkat　； 參考：《暨南大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的:通過研究離子霉素(Ionomycin)對Jurkat T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期、活化、凋亡以及ERK1/2、磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,P-ERK1/2)的影響,探討離子霉素對Jurkat T細(xì)胞增殖調(diào)控中的作用。[方法]:MTT法檢測離子霉素在不同時(shí)間點(diǎn)對Jurkat T細(xì)胞增殖的影響;激光共聚焦顯微鏡下觀察不同濃度離子霉素及不同細(xì)胞增殖抑制劑對Jurkat T細(xì)胞集落形成的影響;MTT法檢測不同濃度離子霉素對Jurkat T細(xì)胞增殖的影響;MTT法比較不同信號通路特異性阻斷劑LY294002、AG490、GF109203X、Genistein、PD98059和離子霉素對Jurkat T細(xì)胞增殖的影響;碘化丙錠(propidiumiodide,PI)染色并結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析比較離子霉素與其他細(xì)胞增殖抑制劑對Jurkat T細(xì)胞周期變化的影響;流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度離子霉素對Jurkat T細(xì)胞凋亡的影響;不同濃度離子霉素處理Jurkat T細(xì)胞,CD69-FITC、CD25-FITC、CD3-PE熒光標(biāo)記單克隆抗體染色,流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度離子霉素對Jurkat T細(xì)胞表面活化標(biāo)志CD69、CD25的影響;通過ELISA檢測經(jīng)不同濃度離子霉素處理的Jurkat T細(xì)胞上清中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的表達(dá)水平;通過Western Blot檢測不同時(shí)間下離子霉素對Jurkat T細(xì)胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)的影響及不同離子霉素對Jurkat T細(xì)胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)的影響并與PD98059比較,分析離子霉素在影響Jurkat T細(xì)胞增殖中的作用及與ERK1/2信號通路之間的關(guān)系;激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度離子霉素對Jurkat T細(xì)胞胞內(nèi)Ca~(2+)的影響;激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度離子霉素對Jurkat T細(xì)胞胞內(nèi)pH的影響。[結(jié)果]:離子霉素對JurkatT細(xì)胞增殖的抑制作用在48h后效果最明顯(P＜0.01);隨著離子霉素濃度從0.1 mg/L逐漸增至4.0 mg/L,Jurkat T細(xì)胞的增殖逐漸減弱,以4.0 mg/L離子霉素的抑制作用最為明顯(r=0.95,P＜0.01),且該濃度下,離子霉素對Jurkat T細(xì)胞增殖的抑制作用較PD98059、AG490、GF109203X和Genistein明顯(P＜0.05);離子霉素在濃度為0.1～8 mg/L時(shí),可抑制Jurkat T細(xì)胞的集落形成;離子霉素可使Jurkat T細(xì)胞周期停滯于G0/G1期,阻止其進(jìn)入S期并可促進(jìn)Jurkat T細(xì)胞的凋亡;離子霉素對Jurkat T細(xì)胞的表面活化標(biāo)志CD69的表達(dá)幾乎無影響,可輕微抑制CD25的表達(dá);離子霉素可抑制Jurkat T細(xì)胞上清中TGF-β的表達(dá),且與離子霉素的濃度有關(guān);離子霉素在濃度為0.1～4 mg/L時(shí),可使Jurkat T細(xì)胞胞內(nèi)Ca~(2+)釋放出來(P＜0.01),且胞內(nèi)pH升高(P＜0.01);離子霉素在1h時(shí)可顯著抑制Jurkat T細(xì)胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)。[結(jié)論]:離子霉素對Jurkat T細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用并影響其集落形成,可使Jurkat T細(xì)胞周期停滯于G0/G1期,阻止其進(jìn)入S期,且對Jurkat T細(xì)胞凋亡有顯著促進(jìn)作用,對Jurkat T細(xì)胞的表面活化標(biāo)志CD69無顯著影響,可輕微抑制CD25的表達(dá);可抑制細(xì)胞上清中TGF-β的表達(dá)水平;可以顯著影響Jurkat T細(xì)胞中ERK1/2、P-ERK1/2蛋白的表達(dá),這些發(fā)現(xiàn)可為腫瘤疾病的治療和新的抗腫瘤藥物的開發(fā)提供新的靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of ionomycin on the proliferation of T cells by MTT assay . The effects of different concentrations of ionomycin on the proliferation of T cells were investigated by MTT assay . The effects of different concentrations of ionomycin on the proliferation of T cells were investigated by MTT assay . The results showed that the inhibitory effect of ionomycin on the proliferation of T cells increased from 0.1 mg / L to 4.0 mg / L ( P < 0 . 05 ) . Conclusion : The effect of ionomycin on the proliferation of T cells and its colony formation can arrest the cell cycle arrest in G0 / G1 phase , prevent it from entering the S phase , and inhibit the expression level of TGF - 尾 .

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

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