本文選題：血栓閉塞性脈管炎 + 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體�。� 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】：血栓閉塞性脈管炎(thromboangitis obilterans, TAO)是一種炎癥性、閉塞性和周期發(fā)作的慢性周圍血管病,多發(fā)于青壯年男性,主要侵犯四肢遠(yuǎn)端的中小動(dòng)靜脈,尤其是下肢血管,是青壯年男性肢體缺血及致殘的主要原因之一。病理變化為血管壁節(jié)段性、非化膿性炎癥伴腔內(nèi)血栓形成,阻塞管腔引起肢體缺血、疼痛,呈周期性發(fā)作,最終引起肢端壞疽。目前只知TAO發(fā)病誘因?yàn)楹畠�、吸煙以及性激素�?而其發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,還沒(méi)有哪一種觀點(diǎn)可以解釋TAO的所有臨床表現(xiàn);同時(shí)該病的治療方法和使用的藥物不盡相同,療效報(bào)道不一,仍為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的難題之一。因此,探索TAO發(fā)病機(jī)理有著重大的理論與實(shí)際意義。 Urocortin(Ucn)是一個(gè)40個(gè)氨基酸的多肽,屬于促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(corticotrophin-releasing factor, CRF)肽類家族。Ucn通過(guò)結(jié)合CRF受體(corticotrophin-releasing factor receptors, CRFRs)發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。近年來(lái)包括本實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的研究表明,外周的Ucn作為一個(gè)自分泌或旁分泌的促炎因子參與很多炎性疾病,如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎等。而且在很多炎癥狀態(tài)下,Ucn能促進(jìn)炎性介質(zhì)的釋放,加重炎癥。另外,Ucn還被報(bào)道參與了血管內(nèi)皮功能紊亂。 環(huán)加氧酶2 (cyclooxygenase-2, COX-2),作為一種參與花生四烯酸代謝的限速酶,被廣泛報(bào)道參與各種炎癥,包括血管炎癥(動(dòng)脈粥樣硬化、TAO)。有研究表明,和正常人相比,TAO病人肱動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張能力下降了近50%,而選擇性COX-2抑制劑則明顯改善血管內(nèi)皮功能。同時(shí),Fiessinger等人多次臨床病例對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果也支持COX-2和TAO的關(guān)系。另一方面,近年來(lái)的很多文獻(xiàn)支持Ucn和COX-2在炎癥中的關(guān)系。Ucn能促進(jìn)COX-2的表達(dá)從而參與了一系列的炎性疾病,如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、血管炎等。而且,COX-2途徑參與了Ucn誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)(如TNF-α、IL-6)的釋放。更為重要的是,選擇性COX-2抑制劑能取消Ucn引起的上述效應(yīng),緩解炎癥。 綜上所述,鑒于TAO的血管炎本質(zhì)和Ucn的促炎作用(包括參與血管內(nèi)皮功能紊亂),我們推測(cè)Ucn與TAO可能有著非常密切的聯(lián)系。那么究竟Ucn對(duì)TAO的發(fā)生發(fā)展有無(wú)影響?有何影響?COX-2是否參與了Ucn的上述作用?至今還未見(jiàn)報(bào)道。本文第一部分采用月桂酸鈉注射大鼠股動(dòng)脈復(fù)制TAO大鼠模型,研究Ucn、COX-2在TAO大鼠病變血管和血液中的表達(dá),探索Ucn對(duì)TAO發(fā)生發(fā)展的影響,評(píng)價(jià)COX-2在TAO中的作用;第二部分利用體外分離培養(yǎng)的大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(RAECs),旨在細(xì)胞水平上研究Ucn對(duì)大鼠血管內(nèi)皮炎癥(LPS預(yù)先刺激造模)中COX-2表達(dá)的影響,并探討相應(yīng)受體和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路機(jī)制。 第一部分Urocortin在大鼠血栓閉塞性脈管炎中的作用及對(duì)血管COX-2表達(dá)的影響 目的:研究Ucn對(duì)大鼠TAO發(fā)生發(fā)展的影響,評(píng)價(jià)COX-2在TAO中的作用,探索TAO的發(fā)病機(jī)理。 方法:月桂酸鈉注射大鼠股動(dòng)脈復(fù)制TAO動(dòng)物模型,并以第十二天各組大鼠患肢的外觀進(jìn)行病變分級(jí)。H-E染色用來(lái)觀察大鼠股動(dòng)脈的形態(tài)學(xué)改變;大鼠的血液學(xué)指標(biāo)(包括血常規(guī)、凝血和血液流變學(xué)指標(biāo))用于生化檢測(cè);ELISA用于檢測(cè)血漿Ucn、TXB2和PGE2的水平;RT-PCR和Western blotting用于檢測(cè)大鼠股動(dòng)脈Ucn、CRFR1/2和COX-2的表達(dá)。 結(jié)果:在造模后的第十二天大多數(shù)大鼠呈典型的TAO癥狀和體征。和假手術(shù)大鼠相比,TAO模型大鼠血液呈高凝狀態(tài),血漿內(nèi)源性Ucn、PGE2水平顯著升高,股動(dòng)脈Ucn、CRFR1、CRFR1α和COX-2表達(dá)明顯增加。給予外源性Ucn則進(jìn)一步加重了高凝狀態(tài),促進(jìn)了COX-2和PGE2的表達(dá),惡化了TAO。Ucn的上述效應(yīng)能被選擇性CRFR1拮抗劑NBI-27914或非選擇性CRFRs拮抗劑astressin阻斷,然而選擇性CRFR2拮抗劑antisauvagine-30則對(duì)Ucn組大鼠無(wú)明顯作用。 結(jié)論: Ucn能促進(jìn)TAO大鼠血液高凝狀態(tài)、COX-2的表達(dá),加重脈管炎。上述作用是由CRFR1介導(dǎo)的。而血小板和COX-2可能是Ucn對(duì)TAO影響的潛在靶點(diǎn)。 第二部分Urocortin對(duì)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞COX-2表達(dá)影響及機(jī)制的研究 目的:研究Ucn對(duì)大鼠血管內(nèi)皮炎癥(LPS預(yù)先刺激造模)中COX-2表達(dá)的影響,并探討相應(yīng)的受體和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路機(jī)制。 方法:大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(RAECs)的分離、培養(yǎng)和鑒定。實(shí)驗(yàn)均采用生長(zhǎng)穩(wěn)定的5-8代RAECs。RT-PCR和Western blotting分別用于檢測(cè)COX-2 mRNA和蛋白的表達(dá)。ELISA用于檢測(cè)細(xì)胞上清液中PGE2的含量;Western blotting檢測(cè)MAPKs (p38MAPK、ERK1/2、JNK)、Akt和NF-κB的磷酸化水平;免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)RAECs內(nèi)NF-κB的核轉(zhuǎn)位情況。 結(jié)果:Ucn呈時(shí)間和濃度依賴性地增強(qiáng)LPS刺激下的RAECs中COX-2的表達(dá);而且上調(diào)的COX-2 mRNA和蛋白分別在4h和8h達(dá)到峰值。Ucn的上述作用能被CRFR2拮抗劑antisauvagine-30完全阻斷,而CRFR1拮抗劑NBI-27914卻沒(méi)有明顯的作用。ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清液PGE2的結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)了上述的發(fā)現(xiàn)。更為重要的是p38MAPK和NF-κB參與了RAECs上CRFR2介導(dǎo)的COX-2表達(dá),而ERK1/2、JNK和Akt無(wú)明顯改變。 結(jié)論:Ucn通過(guò)CRFR2增強(qiáng)了LPS刺激下的RAECs中COX-2的表達(dá)從而參與了血管炎癥,而且p38MAPK和NF-κB參與了CRFR2介導(dǎo)的上述效應(yīng)。 綜上所述,本文工作的主要?jiǎng)?chuàng)新之處在于: 1.整體實(shí)驗(yàn)揭示了Ucn對(duì)TAO大鼠血管炎有顯著地促進(jìn)作用,其機(jī)制與加重血液高凝和上調(diào)COX-2等相關(guān),為探索TAO的發(fā)病機(jī)理積累了學(xué)術(shù)基礎(chǔ)。 2.離體實(shí)驗(yàn)表明Ucn上調(diào)了RAECs中COX-2的表達(dá)從而參與了血管炎癥,其機(jī)制是由CRFR2介導(dǎo)的,與p38MAPK、NF-κB信號(hào)通路的激活相關(guān),為血管炎癥的藥物治療提供了新的靶標(biāo)。 3.整體和離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示COX-2途徑是Ucn參與血管炎癥的重要機(jī)制之一。研究結(jié)果為血管炎癥的防治提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 尚可;袁展群;劉勇;;Rho蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化[J];國(guó)際心血管病雜志;2006年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 尚可;辛伐他汀對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的干預(yù)作用及機(jī)制[D];南昌大學(xué);2007年

2 鄭占樂(lè);法舒地爾對(duì)兔股靜脈移植物內(nèi)膜增厚作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

3 于賢;RhoA與2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈病變的關(guān)系及辛伐他汀干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：1756774