本文選題：血栓閉塞性脈管炎 + 促腎上腺皮質激素釋放因子受體��； 參考：《南京醫(yī)科大學》2009年碩士論文

【摘要】：血栓閉塞性脈管炎(thromboangitis obilterans, TAO)是一種炎癥性、閉塞性和周期發(fā)作的慢性周圍血管病,多發(fā)于青壯年男性,主要侵犯四肢遠端的中小動靜脈,尤其是下肢血管,是青壯年男性肢體缺血及致殘的主要原因之一。病理變化為血管壁節(jié)段性、非化膿性炎癥伴腔內血栓形成,阻塞管腔引起肢體缺血、疼痛,呈周期性發(fā)作,最終引起肢端壞疽。目前只知TAO發(fā)病誘因為寒凍、吸煙以及性激素等,而其發(fā)病機理尚未完全闡明,還沒有哪一種觀點可以解釋TAO的所有臨床表現(xiàn);同時該病的治療方法和使用的藥物不盡相同,療效報道不一,仍為醫(yī)學領域的難題之一。因此,探索TAO發(fā)病機理有著重大的理論與實際意義。 Urocortin(Ucn)是一個40個氨基酸的多肽,屬于促腎上腺皮質激素釋放因子(corticotrophin-releasing factor, CRF)肽類家族。Ucn通過結合CRF受體(corticotrophin-releasing factor receptors, CRFRs)發(fā)揮多種生物學效應。近年來包括本實驗室在內的研究表明,外周的Ucn作為一個自分泌或旁分泌的促炎因子參與很多炎性疾病,如風濕性關節(jié)炎、骨性關節(jié)炎、潰瘍性結腸炎等。而且在很多炎癥狀態(tài)下,Ucn能促進炎性介質的釋放,加重炎癥。另外,Ucn還被報道參與了血管內皮功能紊亂。 環(huán)加氧酶2 (cyclooxygenase-2, COX-2),作為一種參與花生四烯酸代謝的限速酶,被廣泛報道參與各種炎癥,包括血管炎癥(動脈粥樣硬化、TAO)。有研究表明,和正常人相比,TAO病人肱動脈內皮依賴性舒張能力下降了近50%,而選擇性COX-2抑制劑則明顯改善血管內皮功能。同時,Fiessinger等人多次臨床病例對照試驗結果也支持COX-2和TAO的關系。另一方面,近年來的很多文獻支持Ucn和COX-2在炎癥中的關系。Ucn能促進COX-2的表達從而參與了一系列的炎性疾病,如風濕性關節(jié)炎、血管炎等。而且,COX-2途徑參與了Ucn誘導的炎癥介質(如TNF-α、IL-6)的釋放。更為重要的是,選擇性COX-2抑制劑能取消Ucn引起的上述效應,緩解炎癥。 綜上所述,鑒于TAO的血管炎本質和Ucn的促炎作用(包括參與血管內皮功能紊亂),我們推測Ucn與TAO可能有著非常密切的聯(lián)系。那么究竟Ucn對TAO的發(fā)生發(fā)展有無影響?有何影響?COX-2是否參與了Ucn的上述作用?至今還未見報道。本文第一部分采用月桂酸鈉注射大鼠股動脈復制TAO大鼠模型,研究Ucn、COX-2在TAO大鼠病變血管和血液中的表達,探索Ucn對TAO發(fā)生發(fā)展的影響,評價COX-2在TAO中的作用;第二部分利用體外分離培養(yǎng)的大鼠主動脈內皮細胞(RAECs),旨在細胞水平上研究Ucn對大鼠血管內皮炎癥(LPS預先刺激造模)中COX-2表達的影響,并探討相應受體和細胞內信號通路機制。 第一部分Urocortin在大鼠血栓閉塞性脈管炎中的作用及對血管COX-2表達的影響 目的:研究Ucn對大鼠TAO發(fā)生發(fā)展的影響,評價COX-2在TAO中的作用,探索TAO的發(fā)病機理。 方法:月桂酸鈉注射大鼠股動脈復制TAO動物模型,并以第十二天各組大鼠患肢的外觀進行病變分級。H-E染色用來觀察大鼠股動脈的形態(tài)學改變;大鼠的血液學指標(包括血常規(guī)、凝血和血液流變學指標)用于生化檢測;ELISA用于檢測血漿Ucn、TXB2和PGE2的水平;RT-PCR和Western blotting用于檢測大鼠股動脈Ucn、CRFR1/2和COX-2的表達。 結果:在造模后的第十二天大多數(shù)大鼠呈典型的TAO癥狀和體征。和假手術大鼠相比,TAO模型大鼠血液呈高凝狀態(tài),血漿內源性Ucn、PGE2水平顯著升高,股動脈Ucn、CRFR1、CRFR1α和COX-2表達明顯增加。給予外源性Ucn則進一步加重了高凝狀態(tài),促進了COX-2和PGE2的表達,惡化了TAO。Ucn的上述效應能被選擇性CRFR1拮抗劑NBI-27914或非選擇性CRFRs拮抗劑astressin阻斷,然而選擇性CRFR2拮抗劑antisauvagine-30則對Ucn組大鼠無明顯作用。 結論: Ucn能促進TAO大鼠血液高凝狀態(tài)、COX-2的表達,加重脈管炎。上述作用是由CRFR1介導的。而血小板和COX-2可能是Ucn對TAO影響的潛在靶點。 第二部分Urocortin對大鼠主動脈內皮細胞COX-2表達影響及機制的研究 目的:研究Ucn對大鼠血管內皮炎癥(LPS預先刺激造模)中COX-2表達的影響,并探討相應的受體和細胞內信號通路機制。 方法:大鼠主動脈內皮細胞(RAECs)的分離、培養(yǎng)和鑒定。實驗均采用生長穩(wěn)定的5-8代RAECs。RT-PCR和Western blotting分別用于檢測COX-2 mRNA和蛋白的表達。ELISA用于檢測細胞上清液中PGE2的含量;Western blotting檢測MAPKs (p38MAPK、ERK1/2、JNK)、Akt和NF-κB的磷酸化水平;免疫熒光細胞化學法檢測RAECs內NF-κB的核轉位情況。 結果:Ucn呈時間和濃度依賴性地增強LPS刺激下的RAECs中COX-2的表達;而且上調的COX-2 mRNA和蛋白分別在4h和8h達到峰值。Ucn的上述作用能被CRFR2拮抗劑antisauvagine-30完全阻斷,而CRFR1拮抗劑NBI-27914卻沒有明顯的作用。ELISA檢測各組細胞上清液PGE2的結果也進一步證實了上述的發(fā)現(xiàn)。更為重要的是p38MAPK和NF-κB參與了RAECs上CRFR2介導的COX-2表達,而ERK1/2、JNK和Akt無明顯改變。 結論:Ucn通過CRFR2增強了LPS刺激下的RAECs中COX-2的表達從而參與了血管炎癥,而且p38MAPK和NF-κB參與了CRFR2介導的上述效應。 綜上所述,本文工作的主要創(chuàng)新之處在于: 1.整體實驗揭示了Ucn對TAO大鼠血管炎有顯著地促進作用,其機制與加重血液高凝和上調COX-2等相關,為探索TAO的發(fā)病機理積累了學術基礎。 2.離體實驗表明Ucn上調了RAECs中COX-2的表達從而參與了血管炎癥,其機制是由CRFR2介導的,與p38MAPK、NF-κB信號通路的激活相關,為血管炎癥的藥物治療提供了新的靶標。 3.整體和離體實驗結果提示COX-2途徑是Ucn參與血管炎癥的重要機制之一。研究結果為血管炎癥的防治提供了理論依據(jù)。
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【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R363

【共引文獻】

相關期刊論文 前1條

1 尚可;袁展群;劉勇;;Rho蛋白與動脈粥樣硬化[J];國際心血管病雜志;2006年02期

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1 尚可;辛伐他汀對動脈粥樣硬化大鼠的干預作用及機制[D];南昌大學;2007年

2 鄭占樂;法舒地爾對兔股靜脈移植物內膜增厚作用的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

3 于賢;RhoA與2型糖尿病大鼠主動脈病變的關系及辛伐他汀干預的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

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本文編號：1756774