本文選題：細(xì)胞因子 + 免疫狀態(tài)　； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 背景 器官移植術(shù)后病人和自身免疫性疾病患者都常規(guī)使用免疫抑制劑治療,同時相當(dāng)一部分腫瘤患者需要接受放療或者化療。這些治療方案對患者的免疫系統(tǒng)有很強(qiáng)的抑制作用,這就不可避免的帶來了一個重要問題：如何合理使用免疫抑制劑、制定放療或化療方案?一方面如果免疫抑制劑使用不足可能導(dǎo)致移植器官的排斥,或者自身免疫性疾病加重；另一方面如果免疫抑制劑使用過度或者放療、化療過量,使患者免疫系統(tǒng)功能被過度抑制,則可能引發(fā)嚴(yán)重的感染。目前,器官移植術(shù)后和自身免疫疾病死亡病人中,有相當(dāng)一部分是由于免疫抑制劑使用過度繼發(fā)嚴(yán)重感染造成。因此如何合理使用免疫抑制劑,制訂合適的放療、化療方案是目前臨床急需解決的一大難題。而造成這一難題的主要原因是目前沒有一種快速有效的辦法能夠評估患者的免疫狀態(tài),因而無法準(zhǔn)確的判斷免疫抑制劑或者放療化療方案使用是否合理。 細(xì)胞因子由機(jī)體免疫細(xì)胞分泌,是機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的執(zhí)行者和體現(xiàn)者,細(xì)胞因子的水平很大程度上反映了機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)。因此我們可以通過評估機(jī)體的細(xì)胞因子水平來反映機(jī)體的免疫狀態(tài),從而指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理用藥。 在細(xì)胞因子檢測方面,我們選取先進(jìn)的液態(tài)懸浮芯片技術(shù)作為細(xì)胞因子的檢測方法。此方法可同時檢測一份樣本中多達(dá)100種細(xì)胞因子的含量。 目的 1.找到適合的免疫刺激劑,能夠快速有效地刺激全血免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。 2.通過體外實驗,研究不同免疫抑制劑對細(xì)胞因子的抑制作用,總結(jié)出不同免疫抑制劑特異性的細(xì)胞因子譜。 3.進(jìn)一步收集臨床腎移植病人血樣本,總結(jié)出不同免疫狀態(tài)(移植物存活良好,移植物排斥,感染等)下病人細(xì)胞因子的變化規(guī)律,建立不同免疫狀態(tài)下的細(xì)胞因子譜,用于評估患者免疫狀態(tài)。 方法 1.實驗樣本的選擇 以往實驗多選用稀釋的全血或者分離的單個核細(xì)胞作為研究對象,我們進(jìn)行體外實驗的目的是為了更好的模擬機(jī)體的內(nèi)環(huán)境,因此我們選擇未稀釋的肝素化全血作為我們的研究樣本,更好的模擬全血細(xì)胞所處的內(nèi)環(huán)境。 2.免疫刺激劑的選擇 我們比較不同免疫刺激劑刺激全血細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力。對比PHA和PMA+IONO刺激全血細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的變化。進(jìn)一步找出PMA+IONO刺激全血細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的最佳濃度和最佳刺激時間。 3.不同免疫抑制劑以及同一免疫抑制劑不同濃度條件下細(xì)胞因子的變化 加入不同免疫抑制劑與全血共同培養(yǎng)6小時,保證免疫抑制劑與全血細(xì)胞充分作用,再加入免疫刺激劑PMA+IONO刺激全血細(xì)胞分泌細(xì)胞因子,研究不同免疫抑制劑對不同細(xì)胞因子的抑制作用,以及同一免疫抑制劑不同濃度條件下抑制作用的變化。 4.免疫抑制劑單用及聯(lián)合運(yùn)用對細(xì)胞因子譜的影響 按照臨床常見的免疫抑制劑組合,MPA+DEX+FK或者M(jìn)PA+DEX+CsA聯(lián)合使.用,比較免疫抑制劑單用和聯(lián)合使用條件下,細(xì)胞因子譜的變化規(guī)律。 5.細(xì)胞因子檢測方法的選擇 在細(xì)胞因子檢測方面,我們需要全面快速分析全血中多種細(xì)胞因子,因此傳統(tǒng)的ELISA技術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)均無法滿足我們的需求。而液態(tài)懸浮蛋白芯片技術(shù)：它將流式檢測與芯片技術(shù)有機(jī)地結(jié)合在一起,最多可以檢測一份樣本中100種細(xì)胞因子的水平,而且檢測時間短,一次檢測大概花費(fèi)2小時。因此我們選用通過了美國FDA認(rèn)證的液態(tài)懸浮蛋白芯片技術(shù)作為細(xì)胞因子的檢測技術(shù)。 6.統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用方差分析進(jìn)行多組之間的比較,采用LSD法(方差齊)或者Dunnett'sT(方差不齊)進(jìn)行多組之間的兩兩比較。 結(jié)果 1. PMA+IONO能夠快速有效的刺激細(xì)胞因子的分泌,PMA(0.15μg/ml)+IONO(2.5μg/ml)為刺激細(xì)胞因子分泌的最佳刺激濃度。6小時為PMA+IONO刺激細(xì)胞因子分泌的最佳時間點(diǎn)。 2.低濃度DEX (0. 1μg/ml)、中濃度DEX (1μg/ml)及高濃度DEX (10μg/ml)均能抑制的細(xì)胞因子：IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IFN-γ, TNF-a, IL-13和GM-CSF。此外,中濃度DEX (1μg/ml)及高濃度DEX (10μg/ml)還能抑制的細(xì)胞因子有：G-CSF。 3.低濃度CsA(0.05μg/ml)、中濃度CsA(0.25μg/ml)及高濃度CsA(1.25μg/ml)能抑制的細(xì)胞因子：IL-17, IFN-γ, G-CSF和GM-CSF。中濃度CsA(0.25μg/ml)及高濃度CsA (1.25μg/ml)能抑制的細(xì)胞因子：IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13和TNF-α。 4.低濃度FK (1ng/ml)不能抑制任何細(xì)胞因子,中濃度FK (5ng/ml)能抑制細(xì)胞因子GM-CSF。高濃度FK (20ng/ml)能抑制的細(xì)胞因子有：IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, IL-17, IFN-γ, TNF-a和G-CSF。 5.各個濃度的MPA均無法抑制任何細(xì)胞因子的分泌。 6.在DEX(1μg/ml), FK(5ng/ml)和MPA(10μg/ml)三聯(lián)方案中： 1) IL-2, GM-CSF:同空白組相比,僅三藥聯(lián)用組能夠抑制IL-2的分泌。 2) IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF-α, G-CSF:同空白組相比,DEX組及三聯(lián)用藥均能抑制這幾種細(xì)胞因子的分泌.三聯(lián)用藥組與FK組,MPA組細(xì)胞因子水平也有統(tǒng)計學(xué)差異。 3) IFN-y:同空白組相比,MPA組、DEX組及三聯(lián)用藥均能抑制IFN-γ的分泌。三聯(lián)用藥組與FK組,MPA組細(xì)胞因子水平也有統(tǒng)計學(xué)差異。 4) IL-10, IL-17:同空白組相比,單用或聯(lián)用藥物組均無法抑制其分泌。 7.在DEX(1μg/ml), CsA(0.25μg/ml)和MPA(10μg/ml)三聯(lián)方案中： 1) IL-4, GM-CSF:三聯(lián)用藥組與空白組、MPA組有統(tǒng)計學(xué)差異,因此IL-4, GM-CSF主要反映的是CsA和DEX的協(xié)同作用。 2) IL-5, IL-6, IL-13:三聯(lián)用藥組與空白組、CsA組及MPA組有統(tǒng)計學(xué)差異,因此IL-5, IL-6, IL-13主要反映的是DEX的作用。 3) IL-10, G-SCF:三聯(lián)用藥組與空白組、DEX組及MPA組有統(tǒng)計學(xué)差異,因此IL-10, G-SCF主要反映的是CsA作用。 4) IL-2, IFN-y, TNF-a:三聯(lián)用藥組與CsA、DEX、MPA三藥單用組均有統(tǒng)計學(xué)差異,因此這3個因子反映的是三個免疫抑制劑總體協(xié)同抑制作用。 5) IL-17：各組之間均無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： 1. PMA+IONO能夠更快速有效的刺激全血細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。 2.除MPA外,其他免疫抑制劑均能有效的抑制在PMA+IONO刺激條件下某些全血細(xì)胞因子的分泌,不同免疫抑制劑有其特異的細(xì)胞因子抑制譜。隨著免疫抑制劑濃度的增高,細(xì)胞因子的抑制程度也增高。 3.免疫抑制劑在單用和聯(lián)用條件下,細(xì)胞因子譜有一定變化。在FK, DEX及MPA三聯(lián)方案中,我們總結(jié)發(fā)現(xiàn)：IL-2主要反映三種藥物的協(xié)同抑制作用；IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, IFN-γ, TNF-a, G-CSF主要反映DEX的抑制作用；GM-CSF主要反映DEX及FK的協(xié)同抑制作用。在CsA, DEX及MPA三聯(lián)方案中,IL-2, IFN-y, TNF-a主要反映三藥聯(lián)用的抑制情況；IL-4, GM-CSF主要反映CsA和DEX的聯(lián)合抑制作用；IL-5,IL-6,IL-13主要反映DEX的抑制作用。IL-10, G-CSF主要反映的是CsA的抑制作用。從我們總結(jié)的結(jié)果可以得知,即使在三種免疫抑制劑聯(lián)合使用的情況下,仍然有某些細(xì)胞因子特異的反映某一類免疫抑制劑的作用,因此我們可以通過檢測這類細(xì)胞因子,反映其相對應(yīng)的免疫抑制劑的用量,從而更好的指導(dǎo)臨床醫(yī)生更準(zhǔn)確的調(diào)整免疫抑制劑,合理用藥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 曲青山;呂宇濤;張小譜;苗書齋;陳國勇;邢利;蔡文利;;腎移植受者148例死亡原因分析[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

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本文編號：1743459