本文選題：旋毛蟲　切入點：腸道感染性第一期幼蟲　出處：《吉林大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 本研究為篩選旋毛蟲與宿主腸粘膜上皮細(xì)胞相互作用蛋白，首先通過實驗的方法確定收集旋毛蟲腸道感染性第一期幼蟲的最佳時間為經(jīng)口灌服感染性第一期幼蟲后6h。進而用Trizol試劑提取旋毛蟲腸道感染性第一期幼蟲總RNA，以純化的腸道感染性第一期幼蟲mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，將其兩端加上EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端后連接到T7 Select 103b載體，包裝蛋白包裝后，對構(gòu)建好的文庫進行擴增。最后利用膠原酶消化法，分離新生仔豬腸粘膜上皮細(xì)胞，并進行大量的體外培養(yǎng)。以分離到的新生仔豬腸粘膜上皮細(xì)胞為靶標(biāo)，利用全細(xì)胞篩選法對構(gòu)建的旋毛蟲腸道感染性第一期幼蟲T7噬菌體展示cDNA文庫進行篩選。 本研究首次成功構(gòu)建了旋毛蟲腸道感染性第一期幼蟲T7噬菌體展示cDNA文庫，，文庫的庫容量為6.0×10 5 Pfu，擴增后的文庫滴度為1.9×10 12 Pfu/mL，重組率為98%，95%的插入片段在2502000bp之間；通過改進的膠原酶消化法成功的分離得到了新生仔豬腸粘膜上皮細(xì)胞，并對其進行了大量的體外培養(yǎng)；首次以全細(xì)胞篩選法成功的篩選到了旋毛蟲與宿主腸粘膜上皮細(xì)胞相互作用蛋白，命名為IECTsp。I ECTsp基因的成功篩選為研究旋毛蟲與宿主間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及旋毛蟲侵入機體的機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to screen the interaction proteins between Trichinella spiralis and intestinal mucosal epithelial cells, The best time to collect the first stage larvae of Trichinella spiralis is 6 h after oral administration of the first stage larvae, and then the total RNAs of the first stage larvae of intestinal infections of Trichinella spiralis are extracted by Trizol reagent. The purified mRNA of the first stage of intestinal infective larvae was synthesized by reverse transcription. EcoR 鈪

本文編號：1654515