本文選題：Tiam1　切入點：胚泡植入　出處：《重慶醫(yī)科大學》2009年碩士論文

【摘要】： 背景: 生殖現象是生物界最普遍和最根本的特征之一,胚胎著床是人類和哺乳動物生殖過程中妊娠建立的第一步,也是決定妊娠成功與否的關鍵。成功的植入取決于的子宮內膜容受狀態(tài)的建立和具有侵入性的胚泡的生長的同步化。子宮內膜僅在某一特定時期允許胚胎著床,這一時期時間很短,代表著子宮內膜對胚胎具有容受性,稱為“著床窗口期”。胚胎著床過程包括胚泡的定位、識別、結合、黏附、侵入并被包埋到子宮內膜幾個階段[1] [2][3]。該過程涉及到眾多基因的調控以及錯綜復雜的調節(jié)因子的參與,早期的胚胎發(fā)育和著床的詳細分子機制尚未完全清楚。自1829年提出腫瘤胚胎性起源概念以來,胚泡著床與腫瘤侵襲性轉移之間相似的生物學行為[4][5]就越來越受到重視,原癌基因及腫瘤抑制基因也成為了胚泡著床機制研究的熱點。Tiam1 (T-lymphoma invasion and metastasis inducing protein 1,T淋巴細胞侵襲轉移誘導蛋白1)參與腫瘤發(fā)生的多個過程,比如:腫瘤細胞遷移、黏附、侵襲,基質蛋白水解,細胞骨架的再塑形、細胞形態(tài)的轉變和細胞內信號傳導等,而這些過程對胚泡著床也是至關重要的[6] [7][8]。本研究旨在檢測Tiam1在早孕小鼠子宮內膜中的表達規(guī)律,探討Tiam1對小鼠胚胎著床的影響。我們用FQ-PCR和免疫組織化學的方法和Western Blot試驗分別檢測未孕小鼠及早孕2、3、4、5、6、7天子宮內膜Tiam1基因和蛋白的表達規(guī)律。小鼠子宮角于孕4天早晨注射Tiam1抗體后,在孕9天觀察胚泡著床數及其對著床的影響。FQ-PCR結果顯示妊娠小鼠子宮內膜組織Tiam1 mRNA的表達明顯高于未妊娠小鼠,且隨著妊娠天數的增加呈現逐漸增強的趨勢,在妊娠第五天達到最高峰(mean±SD, p0.05)。免疫組化分析顯示Tiam1蛋白在小鼠子宮內膜的表達規(guī)律與FQ-PCR結果一致。Western Blot實驗結果顯示Tiam1蛋白表達的整體趨勢是隨著孕日的推移表達量逐漸增高,孕5天達到最高峰,從孕6天和孕7天開始逐漸降低。子宮角注射Tiam1多克隆抗體后與正常對照組比較,胚泡著床數明顯減少(mean±SD, p0.05)。因此,我們推測Tiam1可能對小鼠胚泡著床起著重要的調控作用。 目的:研究原癌基因Tiam1在小鼠子宮內膜表達的規(guī)律性變化及其對胚泡植入的影響,初步探討它在小鼠胚胎著床過程中的作用。 方法: 1.收集未孕和早孕2、3、4、5、6、7天小鼠子宮內膜,共7組進行Tiam1表達規(guī)律的實驗,每個實驗中均為7個組,每組小鼠的樣本量為20只。 (1)運用實時熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)技術測定Tiam1 mRNA的表達規(guī)律; (2)免疫組織化學SP法檢測未孕和早孕小鼠子宮內膜中Tiam1蛋白的表達情況,并進行定位分析; (3)運用Western Blot試驗對未孕和早孕小鼠子宮內膜中Tiam1蛋白的表達進行定量的分析; 2.孕鼠80只進行Tiam11功能研究。于孕4天上午8AM-9AM小鼠子宮角分別注射抗Tiam1抗體和生理鹽水,于孕9天觀察著床胚泡數并與正常對照組進行對比,分析Tiam1蛋白對胚泡植入的影響。 結果: 1. FQ-PCR:未孕和早孕小鼠的子宮內膜均有Tiam1 mRNA表達,早孕小鼠子宮內膜組織Tiam1mRNA的表達高于未孕小鼠子宮內膜組織,且隨著妊娠天數的增加呈現表達逐漸增強的趨勢,到妊娠第5天達到最高; 2.免疫組織化學: Tiam1蛋白在早孕小鼠子宮內膜廣泛表達,隨著孕日的推移,其表達部位也呈現不同的變化,在孕3-5天主要存在于腔上皮,孕4天至孕6天主要存在于腺上皮,而在基質細胞的表達呈現出隨孕日增加逐漸增加,且在孕5天(著床窗口期)達到最高。 3. Western Blot: Tiam1蛋白表達的整體趨勢是隨著孕日的增加表達量逐漸增高,孕5天達到最高峰,從孕6天、孕7開始逐漸降低。 4.于著床前的孕4天8AM-9AM子宮角注射抗Tiam1抗體,于孕9天觀察胚泡著床數,結果顯示注射抗Tiam1抗體后胚泡著床數明顯減少,差異顯著(p0.05)。 結論: Tiam1 mRNA和蛋白在孕1-5天逐漸增加并在著床窗口期達到最高峰,且Tiam1蛋白在孕2、3天即著床前在腔上皮明顯增加,我們推測Tiam1可能通過重組肌動蛋白骨架、形成和維持緊密連接及增加以E 鈣粘素為基礎的黏附連接來調控著胚泡的移動、定位和黏附。Tiam1蛋白圍繞著床窗在腺上皮細胞的高表達可能與胚泡植入時調控腺體的分泌有關。Tiam1蛋白表達在孕四天的基質細胞顯著增高、在孕五天即著床窗達到最高峰且在孕六天仍保持著高的水平,這些結果可能建議Tiam1可能在胚泡植入的侵襲期間n 入了滋養(yǎng)層的侵襲及細胞外基質的降解。用抗Tiam1抗體在小鼠胚泡著床前的子宮角注射,進而阻斷其生理功能,發(fā)現胚泡著床數明顯減少,推測其很可能在胚泡著床中扮演重要的角色。
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【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R321

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 余志金,許岸高;腫瘤轉移相關基因TIAM1的研究進展[J];實用醫(yī)學雜志;2005年17期

2 倪亞平;莊建良;;Tiam1與腫瘤侵襲轉移的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2007年14期

3 王德盛;竇科峰;李開宗;宋振順;趙青川;;溶血磷脂酸通過Rho信號轉導途徑增強肝癌細胞的侵襲轉移[J];中華醫(yī)學雜志;2006年06期

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本文編號：1653236