本文選題：Tiam1　切入點：胚泡植入　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 背景: 生殖現(xiàn)象是生物界最普遍和最根本的特征之一,胚胎著床是人類和哺乳動物生殖過程中妊娠建立的第一步,也是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵。成功的植入取決于的子宮內(nèi)膜容受狀態(tài)的建立和具有侵入性的胚泡的生長的同步化。子宮內(nèi)膜僅在某一特定時期允許胚胎著床,這一時期時間很短,代表著子宮內(nèi)膜對胚胎具有容受性,稱為“著床窗口期”。胚胎著床過程包括胚泡的定位、識別、結(jié)合、黏附、侵入并被包埋到子宮內(nèi)膜幾個階段[1] [2][3]。該過程涉及到眾多基因的調(diào)控以及錯綜復(fù)雜的調(diào)節(jié)因子的參與,早期的胚胎發(fā)育和著床的詳細(xì)分子機(jī)制尚未完全清楚。自1829年提出腫瘤胚胎性起源概念以來,胚泡著床與腫瘤侵襲性轉(zhuǎn)移之間相似的生物學(xué)行為[4][5]就越來越受到重視,原癌基因及腫瘤抑制基因也成為了胚泡著床機(jī)制研究的熱點。Tiam1 (T-lymphoma invasion and metastasis inducing protein 1,T淋巴細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)蛋白1)參與腫瘤發(fā)生的多個過程,比如:腫瘤細(xì)胞遷移、黏附、侵襲,基質(zhì)蛋白水解,細(xì)胞骨架的再塑形、細(xì)胞形態(tài)的轉(zhuǎn)變和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)等,而這些過程對胚泡著床也是至關(guān)重要的[6] [7][8]。本研究旨在檢測Tiam1在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律,探討Tiam1對小鼠胚胎著床的影響。我們用FQ-PCR和免疫組織化學(xué)的方法和Western Blot試驗分別檢測未孕小鼠及早孕2、3、4、5、6、7天子宮內(nèi)膜Tiam1基因和蛋白的表達(dá)規(guī)律。小鼠子宮角于孕4天早晨注射Tiam1抗體后,在孕9天觀察胚泡著床數(shù)及其對著床的影響。FQ-PCR結(jié)果顯示妊娠小鼠子宮內(nèi)膜組織Tiam1 mRNA的表達(dá)明顯高于未妊娠小鼠,且隨著妊娠天數(shù)的增加呈現(xiàn)逐漸增強(qiáng)的趨勢,在妊娠第五天達(dá)到最高峰(mean±SD, p0.05)。免疫組化分析顯示Tiam1蛋白在小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)規(guī)律與FQ-PCR結(jié)果一致。Western Blot實驗結(jié)果顯示Tiam1蛋白表達(dá)的整體趨勢是隨著孕日的推移表達(dá)量逐漸增高,孕5天達(dá)到最高峰,從孕6天和孕7天開始逐漸降低。子宮角注射Tiam1多克隆抗體后與正常對照組比較,胚泡著床數(shù)明顯減少(mean±SD, p0.05)。因此,我們推測Tiam1可能對小鼠胚泡著床起著重要的調(diào)控作用。 目的:研究原癌基因Tiam1在小鼠子宮內(nèi)膜表達(dá)的規(guī)律性變化及其對胚泡植入的影響,初步探討它在小鼠胚胎著床過程中的作用。 方法: 1.收集未孕和早孕2、3、4、5、6、7天小鼠子宮內(nèi)膜,共7組進(jìn)行Tiam1表達(dá)規(guī)律的實驗,每個實驗中均為7個組,每組小鼠的樣本量為20只。 (1)運用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)技術(shù)測定Tiam1 mRNA的表達(dá)規(guī)律; (2)免疫組織化學(xué)SP法檢測未孕和早孕小鼠子宮內(nèi)膜中Tiam1蛋白的表達(dá)情況,并進(jìn)行定位分析; (3)運用Western Blot試驗對未孕和早孕小鼠子宮內(nèi)膜中Tiam1蛋白的表達(dá)進(jìn)行定量的分析; 2.孕鼠80只進(jìn)行Tiam11功能研究。于孕4天上午8AM-9AM小鼠子宮角分別注射抗Tiam1抗體和生理鹽水,于孕9天觀察著床胚泡數(shù)并與正常對照組進(jìn)行對比,分析Tiam1蛋白對胚泡植入的影響。 結(jié)果: 1. FQ-PCR:未孕和早孕小鼠的子宮內(nèi)膜均有Tiam1 mRNA表達(dá),早孕小鼠子宮內(nèi)膜組織Tiam1mRNA的表達(dá)高于未孕小鼠子宮內(nèi)膜組織,且隨著妊娠天數(shù)的增加呈現(xiàn)表達(dá)逐漸增強(qiáng)的趨勢,到妊娠第5天達(dá)到最高; 2.免疫組織化學(xué): Tiam1蛋白在早孕小鼠子宮內(nèi)膜廣泛表達(dá),隨著孕日的推移,其表達(dá)部位也呈現(xiàn)不同的變化,在孕3-5天主要存在于腔上皮,孕4天至孕6天主要存在于腺上皮,而在基質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)呈現(xiàn)出隨孕日增加逐漸增加,且在孕5天(著床窗口期)達(dá)到最高。 3. Western Blot: Tiam1蛋白表達(dá)的整體趨勢是隨著孕日的增加表達(dá)量逐漸增高,孕5天達(dá)到最高峰,從孕6天、孕7開始逐漸降低。 4.于著床前的孕4天8AM-9AM子宮角注射抗Tiam1抗體,于孕9天觀察胚泡著床數(shù),結(jié)果顯示注射抗Tiam1抗體后胚泡著床數(shù)明顯減少,差異顯著(p0.05)。 結(jié)論: Tiam1 mRNA和蛋白在孕1-5天逐漸增加并在著床窗口期達(dá)到最高峰,且Tiam1蛋白在孕2、3天即著床前在腔上皮明顯增加,我們推測Tiam1可能通過重組肌動蛋白骨架、形成和維持緊密連接及增加以E 鈣粘素為基礎(chǔ)的黏附連接來調(diào)控著胚泡的移動、定位和黏附。Tiam1蛋白圍繞著床窗在腺上皮細(xì)胞的高表達(dá)可能與胚泡植入時調(diào)控腺體的分泌有關(guān)。Tiam1蛋白表達(dá)在孕四天的基質(zhì)細(xì)胞顯著增高、在孕五天即著床窗達(dá)到最高峰且在孕六天仍保持著高的水平,這些結(jié)果可能建議Tiam1可能在胚泡植入的侵襲期間n 入了滋養(yǎng)層的侵襲及細(xì)胞外基質(zhì)的降解。用抗Tiam1抗體在小鼠胚泡著床前的子宮角注射,進(jìn)而阻斷其生理功能,發(fā)現(xiàn)胚泡著床數(shù)明顯減少,推測其很可能在胚泡著床中扮演重要的角色。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R321

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 余志金,許岸高;腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因TIAM1的研究進(jìn)展[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2005年17期

2 倪亞平;莊建良;;Tiam1與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年14期

3 王德盛;竇科峰;李開宗;宋振順;趙青川;;溶血磷脂酸通過Rho信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年06期

，

本文編號：1653236