本文選題：b　切入點(diǎn)：FGF　出處：《免疫學(xué)雜志》2015年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的針對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(b FGF)與成纖維生長(zhǎng)因子受體1c(FGFR1Ⅲc)的結(jié)合位點(diǎn),制備鼠抗人b FGF單克隆抗體并研究其生物學(xué)活性。方法用重組表達(dá)的人b FGF免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾臟常規(guī)融合制備雜交瘤細(xì)胞,通過間接和競(jìng)爭(zhēng)ELISA篩選出與FGFR1Ⅲc有共同結(jié)合位點(diǎn)的抗b FGF單抗。制備小鼠腹水并利用Protein G親和柱純化腹水單抗,SDSPAGE鑒定純化產(chǎn)物;間接ELISA測(cè)定單抗亞類、親和常數(shù),競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定抗體IC50;Western blot和免疫熒光對(duì)單抗的生物學(xué)活性初步鑒定;CCK-8法檢測(cè)單抗對(duì)肺癌細(xì)胞株LL/2的增殖抑制活性。結(jié)果篩選出了2株穩(wěn)定表達(dá)b FGF抗體的細(xì)胞株Mab E12和Mab D9,競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)得其IC50分別為1.564和1.96μg/ml,免疫球蛋白分類兩者均為Ig G1,間接ELISA測(cè)得Mab E12的親和常數(shù)為5.66×108L/mol;Western blot和免疫熒光表明該抗體能與LL/2細(xì)胞內(nèi)天然合成的b FGF相結(jié)合,并對(duì)其增殖產(chǎn)生了較明顯的抑制作用。結(jié)論成功建立了1株能特異性識(shí)別b FGF-FGFR1Ⅲc合位點(diǎn)的單抗,能有效的中和b FGF對(duì)肺癌細(xì)胞株LL/2促增殖作用,為研究腫瘤治療途徑奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to prepare mouse anti-human b FGF monoclonal antibody against the binding site of basic fibroblast growth factor (bFGF) and fibroblast growth factor receptor 1c(FGFR1 鈪，

本文編號(hào)：1647649