發(fā)布時間：2018-03-13 07:16

  本文選題：卵巢早衰　切入點：動物模型　出處：《山東大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 研究背景 卵巢早衰病因和機理比較復雜,尚沒有合理有效的治療方法。卵巢早衰可嚴重影響患者的生活質(zhì)量,而且直接促進某些嚴重疾病的發(fā)生,如卵巢早衰導致年輕婦女不育、提前閉經(jīng)等一系列內(nèi)分泌變化,增加心血管疾病的發(fā)生率,導致骨質(zhì)疏松。因此,進一步探討卵巢早衰(POF)的病因?qū)W及尋求有效的治療方法是解決這個疾病的關鍵。鑒于POF人體研究的可行性低,建立與人類相似的生殖內(nèi)分泌和組織學變化的POF模型對于POF發(fā)病機制的研究和進一步治療具有重要價值。 女性生來具有有限的原始卵泡池,生后不可再生。絕大多數(shù)原始卵泡將走向閉鎖,只有不到1%的卵泡發(fā)育成熟并排卵。因此,暴露于原始卵泡毒性的化學物質(zhì)中的女性生育能力就會受到損害,也可能使女性提早絕經(jīng)。有研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境物質(zhì)能破壞卵泡中的卵母細胞進而影響卵巢功能,由于人們接觸到越來越多的環(huán)境化學物質(zhì)制品,職業(yè)暴露可能增加不孕及卵巢早衰的危險。因此環(huán)境物質(zhì)對卵巢毒性的影響越來越受到關注。 VCD(4-vinylcyclohexene diepoxide)是VCH(4-vinylcyclohexene)的主要代謝產(chǎn)物之一,VCH產(chǎn)生于生產(chǎn)橡膠輪胎、阻燃劑、殺蟲劑、可塑劑及抗氧化劑等的過程中,研究發(fā)現(xiàn)VCH和VCD能選擇性破壞雌鼠和短尾猴卵巢內(nèi)的原始卵泡和初級卵泡,最終引起雌鼠卵巢早衰,而VCD是VCH卵巢毒性的主要活性形式。因此本研究選擇VCD構建POF動物模型,通過觀察陰道涂片及不同時間段卵巢組織學變化等判斷造模效果,旨在觀察卵巢逐步衰竭的過程及探討該動物模型的成功率,和是否是能模擬生理性的卵巢早衰,為卵巢早衰的病因和治療提供研究方法和實驗依據(jù)。 研究目的 1.建立環(huán)境化學物質(zhì)VCD致卵巢早衰小鼠模型。 2.觀察VCD作用下小鼠卵巢功能變化的相關指標。 3.觀察VCD用藥后卵巢功能逐步衰竭的過程。 4.提高人們對環(huán)境因素的關注。 研究內(nèi)容和方法 1.研究對象： 雌性昆明小鼠60只,28天齡,體重90±10 g,購自山東大學動物實驗中心,溫度控制在22±2℃,相對濕度為50%-60%,自由飲食,每天光照時間為12h。 2.研究方法： 2.1實驗方案 將60只小鼠隨機分為VCD組、佐劑對照組、正常對照組和去勢組四組,VCD組和芝麻油組分別每天腹腔注射同等量的VCD和芝麻油5ml／kg,注藥2周后每天觀察小鼠陰道涂片,觀察小鼠動情周期變化。分別于注藥后不同時間取卵巢和子宮組織做組織學檢查,同時計數(shù)各級卵泡數(shù)目,觀察小鼠子宮和卵巢的形態(tài)及組織學變化。 2.2分組與用藥 將實驗動物隨機分為4組： A組：即VCD用藥組20只,每天腹腔注射VCD160mg／kg,即5ml／kgVCD溶液(VCD溶于芝麻油中),連續(xù)注射15天； B組：佐劑對照組即芝麻油組16只,每天注射同等劑量芝麻油5ml／kg,連續(xù)注射15 天； C組：即正常對照組20只,不做任何處理； D組：即去勢組4只,于注藥第1天行雙側(cè)卵巢切除術。 2.3實驗觀察指標 ①小鼠一般狀態(tài)觀察：觀察處理后各組小鼠的活動、飲食及體重變化等情況。 ②小鼠動情周期的觀察：每天取小鼠陰道分泌物涂片并HE染色,觀察小鼠動情周期變化情況。 ③小鼠卵巢和子宮組織學變化：分別取不同時間段(d18,d37,d80和d120天)小鼠卵巢和子宮組織做病理切片并HE染色,切片厚度為5μm,每隔20μm取一張切片,光鏡下觀察小鼠卵巢和子宮的組織學改變。 ④不同時間段卵泡計數(shù)：于注藥后d18,d37,d80和d120天分別卵泡計數(shù),為避免重復計數(shù)卵泡,原始卵泡和初級卵泡以卵母細胞核作為標記物計數(shù),次級卵泡和竇卵泡以卵母細胞核仁為標記物計數(shù)。每只取20張切片分別計數(shù)各級卵泡數(shù)目。 結果 1.動情周期變化：注藥d60天VCD組動情周期不規(guī)則數(shù)占80%,d80天全部紊亂。芝麻油組和正常對照組動情周期變化較穩(wěn)定,去勢組小鼠均處于動情間期,無動情周期變化 2.卵泡計數(shù)和卵巢組織學變化：注藥d18天VCD組原始卵泡消失,初級卵泡較少見,次級卵泡和竇卵泡未見明顯減少,注藥d37天VCD組初級卵泡偶見或消失,次級卵泡和竇卵泡總數(shù)減少至正常對照組的10.08%(8.33／82.67),其卵泡總數(shù)為正常對照組3.96% (11／278),d80天VCD組各階段生長卵泡數(shù)嚴重減少(P0.01)；d120天VCD組5只小鼠卵巢體積均明顯減小(5／5),鏡下見卵巢萎縮明顯、皮質(zhì)增厚、結構紊亂,各級卵泡消失或偶見,正常對照組和芝麻油組可見各級發(fā)育中的卵泡. 3.子宮形態(tài)及組織學變化：注藥d120天VCD組子宮體積萎縮、內(nèi)膜變薄、腺腔小,類似于去勢組子宮變化。正常對照組和芝麻油組子宮內(nèi)膜較厚,固有層腺體豐富. 結論 1.用職業(yè)性環(huán)境化學物質(zhì)VCD能成功建立卵巢早衰動物模型,實驗方法簡便,建模成功率高。 2.本研究結果顯示VCD能選擇性破壞原始卵泡和初級卵泡,最終引起次級卵泡及竇卵泡的減少至消失,提示VCD作用于卵巢的靶細胞可能是原始卵泡和初級卵泡,卵巢組織學觀察并未見炎型反應及壞死結構,其致卵巢早衰的機制可能是通過凋亡途徑。 3.用職業(yè)性環(huán)境化學物質(zhì)VCD所致的卵巢早衰過程類似于女性生理性的卵巢早衰過程,這對于卵巢早衰的臨床研究和治療提供一定的幫助。 4.保護女性遠離卵巢毒性物質(zhì),對女性生殖健康至關重要。
[Abstract]:Research background
The etiology and mechanism of premature ovarian failure is more complex, there is no effective methods for the treatment of premature ovarian failure. It can seriously affect the quality of life of patients, but also directly promote some serious diseases, such as premature ovarian failure in young female infertility, amenorrhea in advance of a series of endocrine changes, increase the incidence of cardiovascular disease, osteoporosis. Therefore, to further explore the etiology of premature ovarian failure (POF) and seeking effective treatment is the key to solve this disease. In view of the feasibility study of the POF body is low, on the establishment of POF model changes similar to human's reproductive internal secretion and tissue in the pathogenesis of POF and further treatment has important value.
濂蟲，

本文編號：1605330