本文關鍵詞： 抗素 環(huán)氧合酶-2 核因子-κB 炎癥信號途徑 C15肽　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學》2010年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： Resistin稱抗素(也稱FIZZ3),是一種含有114個氨基酸的細胞因子。近來發(fā)現(xiàn)resistin具有一系列前炎癥因子的特征,在炎癥中能夠誘導血管內(nèi)皮細胞粘附分子的表達,從而導致白細胞向各個炎癥組織中的浸潤。盡管resistin在炎癥發(fā)生中已有不少報道,但其與經(jīng)典炎癥信號途徑的關系,在炎癥中的作用及其調(diào)控機制尚未闡明。 環(huán)氧合酶2(COX-2)是前列腺素合成中的一個限速酶。在人體中存在兩種不同的COX異構(gòu)體,分別稱為COX-1和COX-2。其中COX-2是一種經(jīng)過誘導而產(chǎn)生的酶,在正常生理條件下維持較低的表達水平,但在炎癥部位表達上調(diào),催化炎性PGs的合成并誘發(fā)炎癥反應。此外,COX-2的啟動子上存在NF-κB的結(jié)合元件,可受轉(zhuǎn)錄因子NF-κB調(diào)控。一些重要的炎癥因子例如TNFa和IL-1可通過激活NF-κB而上調(diào)COX-2的表達。 本研究以resistin為研究對象,采用real-time PCR、Western Blotting和細胞轉(zhuǎn)染等技術,系統(tǒng)研究了resistin通過經(jīng)典的炎癥信號途徑上調(diào)COX-2的基因表達及抗炎肽C15對resistin等引起的炎癥反應的抑制作用分子機制,結(jié)果如下： 1.在巨噬細胞內(nèi)分別轉(zhuǎn)染豬和小鼠resistin的超表達載體,采用real-timePCR和Western Blotting方法檢測細胞內(nèi)源的COX-2的mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達變化。結(jié)果表明,resistin在RAW264.7巨噬細胞系中可以顯著地上調(diào)COX-2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達。更重要的是,通過原核表達制備了抗resistin的抗體,用抗體處理可以抵消resistin的這種作用。 2.以巨噬細胞為模型,通過負顯性IκBα突變體和PDTC這兩種抑制物質(zhì)研究了resistin對COX-2的信號轉(zhuǎn)導途徑的調(diào)控。結(jié)果表明,無論是超表達負顯性IκBα突變體載體,還是用抑制劑PDTC刺激,都可以抑制resistin對COX-2的誘導作用。進一步的研究證實,resistin的超表達可以上調(diào)NF-κB分子中的p65亞基的表達,進而誘導COX-2的表達水平的上升。 3.以resistin對小鼠巨噬細胞作不同時間梯度的處理,用Western Blotting方法分析resistin對一種MAPKKK激酶TAK1 (Transforming growth factorβactivated kinase 1)的磷酸化程度的影響。結(jié)果表明,resistin可以顯著上調(diào)TAK1的磷酸化水平。 4.以促炎物質(zhì)resistin,LPS,PA分別和C15共同處理小鼠巨噬細胞,檢測炎癥基因COX-2和iNOS (inducible nitric oxide synthase)的表達變化。結(jié)果表明,炎癥基因COX-2和iNOS可以被三種促炎物質(zhì)誘導表達,并且這種誘導的情況可以顯著被C15所抑制住。 5.在巨噬細胞中,以LPS在不同時間梯度刺激細胞,用細胞免疫熒光的方法檢測NF-κB的p65亞基的入核情況。結(jié)果證實,C15可以明顯抑制LPS所導致的p65的入核情況,表明C15是通過阻止NF-κB的p65亞基入核,從而抑制相關炎癥因子的表達,進而表現(xiàn)出一定的抗炎活性。
[Abstract]:Resistin, also known as FIZZ3, is a 114 amino acid cytokine. Recently, resistin has been found to have a series of proinflammatory cytokines that induce the expression of adhesion molecules in vascular endothelial cells. Although resistin has been reported to be involved in inflammation, its relationship with the classical inflammatory signaling pathway, its role in inflammation and its regulatory mechanism have not been elucidated. Cyclooxygenase 2 (cyclooxygenase 2) is a rate-limiting enzyme in the synthesis of prostaglandins. There are two different COX isomers in the human body, called COX-1 and COX-2. COX-2 is an induced enzyme. The low expression level was maintained under normal physiological conditions, but up-regulated in inflammatory site, which catalyzed the synthesis of inflammatory PGs and induced inflammatory response. In addition, there were NF- 魏 B binding elements on the promoter of COX-2. Some important inflammatory factors such as TNFa and IL-1 can up-regulate the expression of COX-2 by activating NF- 魏 B. In this study, resistin was used to investigate the mechanism of resistin up-regulation of COX-2 gene expression through classical inflammatory signaling pathway and the inhibitory effect of anti-inflammatory peptide C15 on the inflammatory response induced by resistin by using real-time PCR Western Blotting and cell transfection techniques. The results are as follows:. 1. The superexpression vectors of porcine and mouse resistin were transfected into macrophages, respectively. The expression of mRNA and protein in endogenous COX-2 was detected by real-timePCR and Western Blotting. The results showed that the expression of mRNA and protein of COX-2 was significantly up-regulated in RAW264.7 macrophages. The antibody against resistin was prepared by prokaryotic expression, and the effect of resistin could be counteracted by antibody treatment. 2. Macrophage model was used to study the regulation of resistin signal transduction pathway in COX-2 by negative dominant I 魏 B 偽 mutants and PDTC. The results showed that both overexpression negative dominant I 魏 B 偽 mutant vector and inhibitor PDTC were used to stimulate the signal transduction pathway of COX-2. Further studies showed that the overexpression of resistin could up-regulate the expression of p65 subunit in NF- 魏 B and induce the increase of COX-2 expression. 3. The effect of resistin on the phosphorylation of a MAPKKK kinase TAK1 transforming growth factor 尾 activated kinase 1 was analyzed by Western Blotting. The results showed that resistin could significantly up-regulate the phosphorylation level of TAK1. 4. The expression of inflammatory genes COX-2 and iNOS inducible nitric oxide synthases were detected by co-treatment of mouse macrophages with proinflammatory substance resistinin-LPS-PA and C15, respectively. The results showed that the inflammatory genes COX-2 and iNOS could be induced by three kinds of proinflammatory substances. And this inducement can be significantly suppressed by C 15. 5. In macrophages, the entry of p65 subunit of NF- 魏 B was detected by cellular immunofluorescence with LPS at different time gradient. The results showed that C15 could significantly inhibit p65 entry induced by LPS. It is suggested that C15 inhibits the expression of related inflammatory factors by blocking the p65 subunit of NF- 魏 B into the nucleus and thus exhibits anti-inflammatory activity.
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R363

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 賈悅,周紅文;Resistin在脂肪與胰島素抵抗之間的作用[J];中華糖尿病雜志;2002年06期

2 高霖,姜立清,龐永正,唐朝樞,劉梅林;急性心肌梗死、不穩(wěn)定性心絞痛和原發(fā)性高血壓患者血漿Resistin的含量變化[J];放射免疫學雜志;2004年02期

3 ;新激素resistin聯(lián)系糖尿病與肥胖[J];嶺南心血管病雜志;2003年06期

4 郭錫熔,龔海霞,倪毓輝,費莉,王玢,張敏,陳榮華;Resistin基因在肥胖易感大鼠與肥胖抗性大鼠脂肪組織中表達差異的研究[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2004年05期

5 郭炫,王剛,范桂香;Resistin與肥胖癥和糖尿病的關系及其意義[J];現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志;2004年05期

6 洪慶榮;resistin與胰島素抵抗的研究進展[J];國外醫(yī)學.兒科學分冊;2002年05期

7 倪一虹,陳麗,栗華,陳詩鴻,宋惠玲;血清Resistin水平與2型糖尿病大血管并發(fā)癥的關系[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2004年04期

8 何祥梁,何東華,付祖植;抵抗素(resistin)與2型糖尿病及肥胖癥相關研究進展[J];中國病理生理雜志;2004年12期

9 李瀟;使肥胖與糖尿病聯(lián)系的蛋白質(zhì)resistin[J];中國生物化學與分子生物學報;2001年04期

10 張曉兵;肥胖性胰島素抵抗的研究進展[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;2003年04期

相關會議論文 前10條

1 張建;雷霆;黃劍鋒;陳小冬;楊在清;;Resistin對炎癥信號途徑的調(diào)控研究[A];全國動物生理生化第十一次學術交流會論文摘要匯編[C];2010年

2 ;Resistin is Associated with Mortality in Patients with Traumatic Brain Injury[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學學術年會論文匯編[C];2011年

3 孫福敦;陳麗;宋惠玲;王殿輝;;代謝綜合征與血清Resistin水平關系的研究[A];全國首屆代謝綜合征的基礎與臨床專題學術會議論文匯編[C];2004年

4 ;Significance of Some Critical Inflammatory Factors in Kawasaki Disease:an assessment of Resistin,S100A12 & sRAGE[A];2011年浙江省醫(yī)學會兒科學分會學術年會暨兒內(nèi)科疾病診治新進展國家級學習班論文匯編[C];2011年

5 郭錫熔;倪毓輝;龔海霞;費莉;王玢;張敏;陳榮華;;Resistin基因在肥胖易感大鼠與肥胖抗性大鼠脂肪組織中表達差異的研究[A];中國營養(yǎng)學會第九次全國營養(yǎng)學術會議論文摘要匯編[C];2004年

6 楊穎;張一波;周麗斌;唐金鳳;李鳳英;李榮英;陳名道;;大黃素對3T3—L1細胞葡萄糖攝取及Resistin基因表達的影響[A];第七次全國中西醫(yī)結(jié)合虛證與老年病學術會議論文摘要集[C];2003年

7 周麗斌;陳名道;楊穎;殷峻;唐金鳳;李鳳英;許曼音;陳家倫;;小檗堿對脂肪細胞糖代謝和Leptin、Resistin基因表達的影響[A];中華醫(yī)學會第六次全國內(nèi)分泌學術會議論文匯編[C];2001年

8 唐金鳳;楊穎;張一波;周麗斌;李鳳英;李榮英;陳名道;;大黃素對3T3-L1細胞葡萄糖攝取及Resistin基因表達的影響[A];全國首屆代謝綜合征的基礎與臨床專題學術會議論文匯編[C];2004年

9 趙明輝;張春明;王彥;王德芝;韓佩珍;;抗Resistin合成多肽抗體的制備和鑒定[A];第七屆全軍防原醫(yī)學專業(yè)委員會第五屆中國毒理學會放射毒理專業(yè)委員會學術會議論文匯編[C];2004年

10 侯歲穩(wěn);賈敬芬;;Plant regeneration from callus protoplasts of the forage legume Astragalus melilotoides Pall.[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術大會論文摘要集[C];2003年

相關重要報紙文章 前10條

1 張化;美發(fā)現(xiàn)肥胖糖尿病新激素[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

2 張濤;糖尿病研究捷報頻傳[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

3 楊淑娟;美發(fā)現(xiàn)胰腺干細胞擴增關鍵信號途徑[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 楊淑娟;美發(fā)現(xiàn)潛力巨大的抗腦瘤藥前體[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 余志平 編譯;抗心力衰竭藥物研發(fā)的心肌與激素靶標[N];中國醫(yī)藥報;2007年

6 于麗珊;老年病可因細胞周期調(diào)控失衡引起[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

7 衣曉峰;光動力療法抗腦膠質(zhì)瘤機制被揭示[N];健康報;2007年

8 余志平;靶向蛋白酶：成功、失敗與前景(一)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 楊淑娟;肝臟分子修復失控可能致癌變[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 實習記者　王華鋒;浙江中醫(yī)藥大學創(chuàng)新研究中藥有效成分技術平臺[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 龔海霞;Resistin及其結(jié)合多肽與3T3-L1細胞分化關系的研究[D];南京醫(yī)科大學;2004年

2 張健;Resistin對炎癥信號途徑的調(diào)控研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

3 李雅慧;Resistin蛋白在胰島素抗性形成中的分子生物學機制[D];第二軍醫(yī)大學;2004年

4 陳小冬;脂肪細胞因子TNF-α與resistin的表達及其對豬脂肪代謝的調(diào)控作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2004年

5 鄭錦花;天然抗氧化物拮抗胰島素抵抗的分子靶點篩選[D];吉林大學;2011年

6 苗蕾;炎癥因子及脂肪因子與高尿酸血癥的關系及民族異質(zhì)性研究[D];新疆醫(yī)科大學;2012年

7 董世芬;小檗堿治療實驗性糖尿病心肌病作用和機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

8 朱曉琳;脂肪細胞因子對氣道上皮炎癥及免疫應激功能調(diào)控[D];中南大學;2013年

9 張偉;抗氧化逆轉(zhuǎn)IR-修復糖代謝失控的作用及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

10 祝麗s，

本文編號：1512703