本文關鍵詞： 血小板 紅細胞 T淋巴細胞 免疫　出處：《第二軍醫(yī)大學》2008年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 免疫系統(tǒng)承擔著免疫防御、免疫自穩(wěn)和免疫監(jiān)視三方面的基本功能。T淋巴細胞是主要的免疫細胞,其亞群的平衡對病原體的清除和疾病的轉歸有重要的影響,他們的功能異�？蓪е略S多疾病如腫瘤、自身免疫病、炎性疾病等疾病的產生。由于機體免疫應答過程復雜,正常情況下,各免疫細胞與T淋巴細胞相互協(xié)調和相互制約,形成一個動態(tài)的免疫網(wǎng)絡,維持著機體正常免疫功能。如今血液系統(tǒng)如何維持一種免疫平衡狀態(tài)仍未被充分認識。由于臨床疾病的免疫失衡狀態(tài)不同,臨床表現(xiàn)變化多樣,臨床治療也只能局限于治標不治本的方法。闡明免疫系統(tǒng)的平衡調節(jié)過程具有重要的臨床意義和應用價值。 人類血液由血漿和血細胞組成,血細胞可分為紅細胞、白細胞和血小板三類。隨著研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)血小板和紅細胞不僅在機體天然免疫過程中發(fā)揮了重要作用而且在適應性免疫過程中起著關鍵的作用。目前紅細胞、血小板對T淋巴細胞的作用還存在較大爭議。自1981年Siegel提出“紅細胞免疫系統(tǒng)”新概念以來,國內外對紅細胞的免疫功能進行了深入研究�，F(xiàn)已證明紅細胞不僅對NK細胞、吞噬細胞等具有免疫功能調節(jié),而且對淋巴細胞也具有重要的調節(jié)功能,如紅細胞可促進T淋巴細胞產生γ—干擾素。有學者提出紅細胞是T細胞的活性調節(jié)器。有國內學者曾模擬血液內環(huán)境,以研究血細胞的免疫作用提出了“紅細胞主干道傳遞途徑”的理論,即:抗原在激活血液免疫系統(tǒng)過程中,絕大部分抗原都要被紅細胞免疫粘附,經過一定處理后,再遞交給白細胞(包括淋巴細胞、樹突狀細胞等)甚至血小板從而引發(fā)白細胞一系列免疫反應。紅細胞首先激活和改變了淋巴細胞的活性。 同時大量研究表明,血小板不僅參與止血、炎癥反應等過程,還具有重要的免疫功能。如血小板可促進DC細胞成熟;影響T、B淋巴細胞的增殖、分化和效應發(fā)揮等。有學者提出血小板可傳遞并擴大抗原刺激信號,連接天然免疫和適應性免疫,進而凋控免疫反應的程度;并被稱為機體免疫系統(tǒng)的哨兵。 既然血小板和紅細胞在免疫反應過程中均充當了重要角色,那么在血液免疫反應過程,機體免疫失衡的原因是血小板免疫失衡還是紅細胞免疫失衡,即是“紅細胞主干道傳遞途徑”還是血小板啟動免疫反應聯(lián)接天然免疫和適應性免疫?他們之間存在著怎樣的免疫網(wǎng)絡關系? 為此我們采用滅活腫瘤細胞S_(180)(5×10~9/L)激活血液免疫系統(tǒng),來研究血小板和紅細胞的免疫變化關系。然而在這個實驗過程中我們發(fā)現(xiàn),血液免疫反應系統(tǒng)中的血小板雖可被激活,但并未發(fā)生聚集變化。由于血小板被激活后可表現(xiàn)為黏附、聚集、釋放等不同程度的活性的變化,并在腫瘤炎性疾病發(fā)病過程中發(fā)揮了重要的作用:并且免疫應答是一個復雜的過程,血小板不同程度的活性變化可能誘導不同的免疫反應。顯然血小板的全部活性以及由此誘發(fā)的免疫系統(tǒng)功能的變化,在僅用S_(180)(5×10~9/L)激活的血液免疫系統(tǒng)中可能并不能完全反映。血小板聚集標志著其免疫功能失衡:同時認識血液免疫應答過程中血小板聚集前后誘發(fā)的紅細胞免疫功能狀態(tài)的變化,能夠使我們進一步闡明機體免疫失衡的原因是血小板免疫失衡還是紅細胞免疫失衡。為了闡明血小板和紅細胞在血液免疫系統(tǒng)中的作用,認識血小板和紅細胞免疫失衡誘發(fā)的機體免疫系統(tǒng)功能的變化,有必要建立血小板全部活性的得以體現(xiàn)的血液免疫系統(tǒng)。為此在進行本課題研究的過程中,我們建立了血小板免疫失衡血液系統(tǒng),并應用此血液免疫系統(tǒng),深入探討了血小板和紅細胞對T淋巴細胞的調控作用及其調控關系:證明了血小板是啟動T細胞亞群平衡發(fā)生動態(tài)變化的關鍵,而紅細胞則維持其免疫平衡;血小板免疫失衡是機體免疫失衡的原因;紅細胞免疫失衡是機體免疫失衡的結果。 第一部分血小板和紅細胞對T淋巴細胞亞群調控作用的實驗研究 (一)目的 在體外實驗中,初步探討血小板(platelet,PL)和紅細胞(red blood cell,RBC)對T細胞亞群的調控作用及它們之間調控關系。 (二)方法 1、按不同的實驗條件將血液反應系統(tǒng)分為4組,全血細胞組、去RBC組、去PL組、去RBC去PL組;以滅活S_(180)(5×10~9/L)激活組為實驗組,同時設置生理鹽水(normal sodium,NS)對照組。 2、FCM測定細胞表面免疫分子表達的變化。 (三)結果 1、各組T細胞CD4和CD8和變化結果 與去PL組比較,全血細胞實驗組和對照組淋巴細胞CD4、CD3~+CD4~+/CD3~+和CD3~+CD8~+/CD3~+均變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與去RBC組比較,全血細胞織淋巴細胞CD4和CD3~+CD4~+/CD3~+升高,CD3~+CD8~+/CD3~+降低:實驗組和對照組均(P＜0.01)。與去RBC去PL組比較,去RBC組淋巴細胞CD4和CD3~+CD4~+/CD3~+升高,CD3~+CD8~+/CD3~+降低:實驗組(P＜0.05)、對照組(P＞0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組淋巴細胞CD4和CD3~+CD4~+/CD3~+升高,CD3~+CD8~+/CD3~+降低:實驗組和對照組均(P＜0.001)。全血細胞組、去PL組和去RBC去PL組中CD4和CD8均呈負相關(P＜0.05);而去RBC組CD4和CD8相關性無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2、各組PL_(CD59)、PL_(CD62P)和RBC_(CD35)的變化結果 與去RBC組比較,全血細胞對照組PL_(CD59)表達下降(P＜0.05),實驗組變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);全血細胞實驗組和對照組PL_(CD62P)表達均升高(P＜0.05)。與去PL組比較,全血細胞實驗組和對照組RBC_(CD35)表達下降:均(P＜0.05)。與對照組比較,全血細胞實驗組中血小板PL_(CD62P)表達升高(P＜0.05),紅細胞RBC_(CD35)下降(P＜0.05)。 (四)結論 血小板是啟動T細胞免疫平衡動態(tài)變化的原因;而紅細胞則維持其動態(tài)平衡。 第二部分血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構建及血小板和紅細胞對淋巴細胞CD4~+CD25~+表達的影響 (一)目的 1、選擇合適的抗原;構建血小板免疫火衡的血液免疫反應系統(tǒng)。 2、應用實驗新體系,初步研究血小板(PL)和紅細胞(RBC)對淋巴細胞CD4~+CD25~+表達的影響。 (二)方法 1、選取合適的抗原: (1)瑞氏染色,光鏡下觀察酵母菌和S_(180)濃度變化對血小板聚集的影響。 (2)瑞氏染色,光鏡下觀察不同補體活化途徑被阻斷,對酵母菌和S_(180)誘導血小板聚集的影響。 (3)應用酵母菌、S_(180)、活化補體包被的酵母菌和活化補體包被的S_(180)作為誘導劑,血小板聚集儀測定血小板聚集曲線的變化。 2、血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構建:應用選取的抗原,激活血液免疫系統(tǒng)。 3、FCM測定淋巴細胞CD4~+CD25~+表達水平的變化。 (三)結果 1、酵母菌和S_(180)均可通過激活補體而誘導血小板黏附和聚集等活性變化,并與其劑量相關:酵母菌(2×10~9/L、4×10~9/L)和S_(180)(5×10~9/L、1×10~(10)/L)均不能引起血小板聚集:酵母菌(8×10~9/L、16×10~9/L)和S_(180)(2×10~(10)/L、4×10~(10)/L)均可引起血小板聚集。 2、血小板聚集儀測定5min,酵母菌(4×10~9/L)和S_(180)(4×10~(10)/L)均不能誘導血小板聚集;補體包被酵母菌(4×10~9/L)和補體包被S_(180)(4×10~(10)/L)均可立即誘導血小板聚集。 3、血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構建 分別用低濃度S_(180)(5×10~9/L)和高濃度S_(180)(3×10~(10)/L)作為抗原,激活血液免疫反應系統(tǒng),同時設置NS用刺激的血液免疫反應系統(tǒng)作對照;即:同時設置NS刺激對照血液免疫反應系統(tǒng)、低濃度抗原L_(S180)(5×10~9/LS_(180))抗原激活血液免疫反應實驗系統(tǒng)和高濃度抗原H _(S180)(3×10~(10)/LS_(180))激活血液免疫反應實驗系統(tǒng)。 4、各組淋巴細胞CD4~+CD25~+表達水平比較 與去PL組比較,全血細胞對照組和L_(S180)實驗組均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)、H_(S180)實驗組升高(P＜0.05)。與去RBC組比較,全血細胞對照組和L_(S180)實驗組均降低(P＜0.05),但H_(S180)實驗組升高(P＜0.05).與去RBC去PL組比較,去RBC組對照組和L_(S180)實驗組變化均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)、H_(S180)實驗組降低(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組對照組、L_(S180)實驗組和H_(S180)實驗組均降低(P＜0.05)。 (四)結論 1、建立了血小板免疫失衡血液系統(tǒng)。 2、紅細胞可雙向調節(jié)淋巴細胞CD4~+CD25~+的表達水平,血小板聚集變化是紅細胞發(fā)揮正向調節(jié)作用的關鍵原因。 第三部分血小板和紅細胞對Th細胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的影響 (一)目的 研究血小板和紅細胞對Th細胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的影響。 (二)方法 采用ELASE法測定分泌IFN-r和IL-10的變化情況。 (三)結果 1、各組IFN-r/IL-10的變化結果 與去PL組比較,全血細胞對照組和L_(S180)實驗組均變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),H_(S180)實驗組降低(P＜0.05)。全血細胞組與去RBC組比較:對照組、L_(S180)實驗組和H_(S180)實驗組均變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。去RBC組與去RBC去PL組比較:對照組和L_(S180)實驗組升高(P＜0.05),但H_(S180)實驗組降低(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組對照組和L_(S180)實驗組升高(P＜0.05)、H_(S180)實驗組變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2、各組IFN-r的變化結果 與去PL組比較,全血細胞對照組和L_(S180)實驗組升高(P＜0.05)、H_(S180)實驗組變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與去RBC組比較,全血細胞組對照組和H_(S180)實驗組均變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),L_(S180)實驗組升高(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去RBC組對照組升高(P＜0.05),L_(S180)實驗組變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),H_(S180)實驗組下降(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組對照組升高(P＜0.05),L_(S180)實驗組和H_(S180)實驗組均變化無統(tǒng)計學意義(P9＞0.05)。 3、各組IL-10的變化結果 與去PL組比較,全血細胞全血細胞組對照組變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),L_(S180)實驗組和H_(S180)實驗組升高(P＜0.05)。與去RBC組比較,全血細胞對照組和L_(S180)實驗組變化均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05).H_(S180)實驗組升高(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去RBC組對照組和H_(S180)實驗組均變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),L_(S180)實驗組降低(P＜0.05)。去PL組與去RBC去PL組比較:對照組IL-10的變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),L_(S180)實驗組下降(P＜0.05),H_(S180)實驗組升高(P＜0.05)。 (四)結論 血小板是啟動Th細胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的關鍵;而紅細胞則是機體免疫應答選擇細胞免疫還是體液免疫的根本原因。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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本文編號：1480742