本文關(guān)鍵詞： 血小板 紅細(xì)胞 T淋巴細(xì)胞 免疫　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 免疫系統(tǒng)承擔(dān)著免疫防御、免疫自穩(wěn)和免疫監(jiān)視三方面的基本功能。T淋巴細(xì)胞是主要的免疫細(xì)胞,其亞群的平衡對(duì)病原體的清除和疾病的轉(zhuǎn)歸有重要的影響,他們的功能異�？蓪�(dǎo)致許多疾病如腫瘤、自身免疫病、炎性疾病等疾病的產(chǎn)生。由于機(jī)體免疫應(yīng)答過程復(fù)雜,正常情況下,各免疫細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞相互協(xié)調(diào)和相互制約,形成一個(gè)動(dòng)態(tài)的免疫網(wǎng)絡(luò),維持著機(jī)體正常免疫功能。如今血液系統(tǒng)如何維持一種免疫平衡狀態(tài)仍未被充分認(rèn)識(shí)。由于臨床疾病的免疫失衡狀態(tài)不同,臨床表現(xiàn)變化多樣,臨床治療也只能局限于治標(biāo)不治本的方法。闡明免疫系統(tǒng)的平衡調(diào)節(jié)過程具有重要的臨床意義和應(yīng)用價(jià)值。 人類血液由血漿和血細(xì)胞組成,血細(xì)胞可分為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板三類。隨著研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)血小板和紅細(xì)胞不僅在機(jī)體天然免疫過程中發(fā)揮了重要作用而且在適應(yīng)性免疫過程中起著關(guān)鍵的作用。目前紅細(xì)胞、血小板對(duì)T淋巴細(xì)胞的作用還存在較大爭(zhēng)議。自1981年Siegel提出“紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)”新概念以來,國內(nèi)外對(duì)紅細(xì)胞的免疫功能進(jìn)行了深入研究�，F(xiàn)已證明紅細(xì)胞不僅對(duì)NK細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等具有免疫功能調(diào)節(jié),而且對(duì)淋巴細(xì)胞也具有重要的調(diào)節(jié)功能,如紅細(xì)胞可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生γ—干擾素。有學(xué)者提出紅細(xì)胞是T細(xì)胞的活性調(diào)節(jié)器。有國內(nèi)學(xué)者曾模擬血液內(nèi)環(huán)境,以研究血細(xì)胞的免疫作用提出了“紅細(xì)胞主干道傳遞途徑”的理論,即:抗原在激活血液免疫系統(tǒng)過程中,絕大部分抗原都要被紅細(xì)胞免疫粘附,經(jīng)過一定處理后,再遞交給白細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等)甚至血小板從而引發(fā)白細(xì)胞一系列免疫反應(yīng)。紅細(xì)胞首先激活和改變了淋巴細(xì)胞的活性。 同時(shí)大量研究表明,血小板不僅參與止血、炎癥反應(yīng)等過程,還具有重要的免疫功能。如血小板可促進(jìn)DC細(xì)胞成熟;影響T、B淋巴細(xì)胞的增殖、分化和效應(yīng)發(fā)揮等。有學(xué)者提出血小板可傳遞并擴(kuò)大抗原刺激信號(hào),連接天然免疫和適應(yīng)性免疫,進(jìn)而凋控免疫反應(yīng)的程度;并被稱為機(jī)體免疫系統(tǒng)的哨兵。 既然血小板和紅細(xì)胞在免疫反應(yīng)過程中均充當(dāng)了重要角色,那么在血液免疫反應(yīng)過程,機(jī)體免疫失衡的原因是血小板免疫失衡還是紅細(xì)胞免疫失衡,即是“紅細(xì)胞主干道傳遞途徑”還是血小板啟動(dòng)免疫反應(yīng)聯(lián)接天然免疫和適應(yīng)性免疫?他們之間存在著怎樣的免疫網(wǎng)絡(luò)關(guān)系? 為此我們采用滅活腫瘤細(xì)胞S_(180)(5×10~9/L)激活血液免疫系統(tǒng),來研究血小板和紅細(xì)胞的免疫變化關(guān)系。然而在這個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中我們發(fā)現(xiàn),血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)中的血小板雖可被激活,但并未發(fā)生聚集變化。由于血小板被激活后可表現(xiàn)為黏附、聚集、釋放等不同程度的活性的變化,并在腫瘤炎性疾病發(fā)病過程中發(fā)揮了重要的作用:并且免疫應(yīng)答是一個(gè)復(fù)雜的過程,血小板不同程度的活性變化可能誘導(dǎo)不同的免疫反應(yīng)。顯然血小板的全部活性以及由此誘發(fā)的免疫系統(tǒng)功能的變化,在僅用S_(180)(5×10~9/L)激活的血液免疫系統(tǒng)中可能并不能完全反映。血小板聚集標(biāo)志著其免疫功能失衡:同時(shí)認(rèn)識(shí)血液免疫應(yīng)答過程中血小板聚集前后誘發(fā)的紅細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的變化,能夠使我們進(jìn)一步闡明機(jī)體免疫失衡的原因是血小板免疫失衡還是紅細(xì)胞免疫失衡。為了闡明血小板和紅細(xì)胞在血液免疫系統(tǒng)中的作用,認(rèn)識(shí)血小板和紅細(xì)胞免疫失衡誘發(fā)的機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的變化,有必要建立血小板全部活性的得以體現(xiàn)的血液免疫系統(tǒng)。為此在進(jìn)行本課題研究的過程中,我們建立了血小板免疫失衡血液系統(tǒng),并應(yīng)用此血液免疫系統(tǒng),深入探討了血小板和紅細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞的調(diào)控作用及其調(diào)控關(guān)系:證明了血小板是啟動(dòng)T細(xì)胞亞群平衡發(fā)生動(dòng)態(tài)變化的關(guān)鍵,而紅細(xì)胞則維持其免疫平衡;血小板免疫失衡是機(jī)體免疫失衡的原因;紅細(xì)胞免疫失衡是機(jī)體免疫失衡的結(jié)果。 第一部分血小板和紅細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究 (一)目的 在體外實(shí)驗(yàn)中,初步探討血小板(platelet,PL)和紅細(xì)胞(red blood cell,RBC)對(duì)T細(xì)胞亞群的調(diào)控作用及它們之間調(diào)控關(guān)系。 (二)方法 1、按不同的實(shí)驗(yàn)條件將血液反應(yīng)系統(tǒng)分為4組,全血細(xì)胞組、去RBC組、去PL組、去RBC去PL組;以滅活S_(180)(5×10~9/L)激活組為實(shí)驗(yàn)組,同時(shí)設(shè)置生理鹽水(normal sodium,NS)對(duì)照組。 2、FCM測(cè)定細(xì)胞表面免疫分子表達(dá)的變化。 (三)結(jié)果 1、各組T細(xì)胞CD4和CD8和變化結(jié)果 與去PL組比較,全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組淋巴細(xì)胞CD4、CD3~+CD4~+/CD3~+和CD3~+CD8~+/CD3~+均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與去RBC組比較,全血細(xì)胞織淋巴細(xì)胞CD4和CD3~+CD4~+/CD3~+升高,CD3~+CD8~+/CD3~+降低:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均(P＜0.01)。與去RBC去PL組比較,去RBC組淋巴細(xì)胞CD4和CD3~+CD4~+/CD3~+升高,CD3~+CD8~+/CD3~+降低:實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)、對(duì)照組(P＞0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組淋巴細(xì)胞CD4和CD3~+CD4~+/CD3~+升高,CD3~+CD8~+/CD3~+降低:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均(P＜0.001)。全血細(xì)胞組、去PL組和去RBC去PL組中CD4和CD8均呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05);而去RBC組CD4和CD8相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2、各組PL_(CD59)、PL_(CD62P)和RBC_(CD35)的變化結(jié)果 與去RBC組比較,全血細(xì)胞對(duì)照組PL_(CD59)表達(dá)下降(P＜0.05),實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組PL_(CD62P)表達(dá)均升高(P＜0.05)。與去PL組比較,全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組RBC_(CD35)表達(dá)下降:均(P＜0.05)。與對(duì)照組比較,全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中血小板PL_(CD62P)表達(dá)升高(P＜0.05),紅細(xì)胞RBC_(CD35)下降(P＜0.05)。 (四)結(jié)論 血小板是啟動(dòng)T細(xì)胞免疫平衡動(dòng)態(tài)變化的原因;而紅細(xì)胞則維持其動(dòng)態(tài)平衡。 第二部分血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構(gòu)建及血小板和紅細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞CD4~+CD25~+表達(dá)的影響 (一)目的 1、選擇合適的抗原;構(gòu)建血小板免疫火衡的血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)。 2、應(yīng)用實(shí)驗(yàn)新體系,初步研究血小板(PL)和紅細(xì)胞(RBC)對(duì)淋巴細(xì)胞CD4~+CD25~+表達(dá)的影響。 (二)方法 1、選取合適的抗原: (1)瑞氏染色,光鏡下觀察酵母菌和S_(180)濃度變化對(duì)血小板聚集的影響。 (2)瑞氏染色,光鏡下觀察不同補(bǔ)體活化途徑被阻斷,對(duì)酵母菌和S_(180)誘導(dǎo)血小板聚集的影響。 (3)應(yīng)用酵母菌、S_(180)、活化補(bǔ)體包被的酵母菌和活化補(bǔ)體包被的S_(180)作為誘導(dǎo)劑,血小板聚集儀測(cè)定血小板聚集曲線的變化。 2、血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構(gòu)建:應(yīng)用選取的抗原,激活血液免疫系統(tǒng)。 3、FCM測(cè)定淋巴細(xì)胞CD4~+CD25~+表達(dá)水平的變化。 (三)結(jié)果 1、酵母菌和S_(180)均可通過激活補(bǔ)體而誘導(dǎo)血小板黏附和聚集等活性變化,并與其劑量相關(guān):酵母菌(2×10~9/L、4×10~9/L)和S_(180)(5×10~9/L、1×10~(10)/L)均不能引起血小板聚集:酵母菌(8×10~9/L、16×10~9/L)和S_(180)(2×10~(10)/L、4×10~(10)/L)均可引起血小板聚集。 2、血小板聚集儀測(cè)定5min,酵母菌(4×10~9/L)和S_(180)(4×10~(10)/L)均不能誘導(dǎo)血小板聚集;補(bǔ)體包被酵母菌(4×10~9/L)和補(bǔ)體包被S_(180)(4×10~(10)/L)均可立即誘導(dǎo)血小板聚集。 3、血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構(gòu)建 分別用低濃度S_(180)(5×10~9/L)和高濃度S_(180)(3×10~(10)/L)作為抗原,激活血液免疫反應(yīng)系統(tǒng),同時(shí)設(shè)置NS用刺激的血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)作對(duì)照;即:同時(shí)設(shè)置NS刺激對(duì)照血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)、低濃度抗原L_(S180)(5×10~9/LS_(180))抗原激活血液免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和高濃度抗原H _(S180)(3×10~(10)/LS_(180))激活血液免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。 4、各組淋巴細(xì)胞CD4~+CD25~+表達(dá)水平比較 與去PL組比較,全血細(xì)胞對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)、H_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)。與去RBC組比較,全血細(xì)胞對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組均降低(P＜0.05),但H_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05).與去RBC去PL組比較,去RBC組對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)、H_(S180)實(shí)驗(yàn)組降低(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組對(duì)照組、L_(S180)實(shí)驗(yàn)組和H_(S180)實(shí)驗(yàn)組均降低(P＜0.05)。 (四)結(jié)論 1、建立了血小板免疫失衡血液系統(tǒng)。 2、紅細(xì)胞可雙向調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞CD4~+CD25~+的表達(dá)水平,血小板聚集變化是紅細(xì)胞發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵原因。 第三部分血小板和紅細(xì)胞對(duì)Th細(xì)胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的影響 (一)目的 研究血小板和紅細(xì)胞對(duì)Th細(xì)胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的影響。 (二)方法 采用ELASE法測(cè)定分泌IFN-r和IL-10的變化情況。 (三)結(jié)果 1、各組IFN-r/IL-10的變化結(jié)果 與去PL組比較,全血細(xì)胞對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),H_(S180)實(shí)驗(yàn)組降低(P＜0.05)。全血細(xì)胞組與去RBC組比較:對(duì)照組、L_(S180)實(shí)驗(yàn)組和H_(S180)實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。去RBC組與去RBC去PL組比較:對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05),但H_(S180)實(shí)驗(yàn)組降低(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)、H_(S180)實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2、各組IFN-r的變化結(jié)果 與去PL組比較,全血細(xì)胞對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)、H_(S180)實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與去RBC組比較,全血細(xì)胞組對(duì)照組和H_(S180)實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),L_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去RBC組對(duì)照組升高(P＜0.05),L_(S180)實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),H_(S180)實(shí)驗(yàn)組下降(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去PL組對(duì)照組升高(P＜0.05),L_(S180)實(shí)驗(yàn)組和H_(S180)實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P9＞0.05)。 3、各組IL-10的變化結(jié)果 與去PL組比較,全血細(xì)胞全血細(xì)胞組對(duì)照組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),L_(S180)實(shí)驗(yàn)組和H_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)。與去RBC組比較,全血細(xì)胞對(duì)照組和L_(S180)實(shí)驗(yàn)組變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).H_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)。與去RBC去PL組比較,去RBC組對(duì)照組和H_(S180)實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),L_(S180)實(shí)驗(yàn)組降低(P＜0.05)。去PL組與去RBC去PL組比較:對(duì)照組IL-10的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),L_(S180)實(shí)驗(yàn)組下降(P＜0.05),H_(S180)實(shí)驗(yàn)組升高(P＜0.05)。 (四)結(jié)論 血小板是啟動(dòng)Th細(xì)胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的關(guān)鍵;而紅細(xì)胞則是機(jī)體免疫應(yīng)答選擇細(xì)胞免疫還是體液免疫的根本原因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1480742