本文關鍵詞： DNA疫苗載體 PAMAM樹狀化合物 細胞毒性 免疫　出處：《北京交通大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： DNA疫苗能刺激機體產(chǎn)生細胞免疫與體液免疫,其制造成本低廉,易于儲存及運輸。但是,裸DNA疫苗在體內(nèi)傳輸過程中,很容易被酶水解,不能引起足夠的免疫原性,很難達到好的免疫保護效果。DNA遞送載體能夠保護DNA分子不被酶水解。本課題選取聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀化合物作為基因疫苗遞送載體,通過細胞毒性實驗及細胞凋亡實驗研究了PAMAM G4及PAMAM G5在多種細胞系中的毒性,在此基礎上初步探索了該樹狀化合物作為人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus, RSV)基因疫苗載體的在動物模型上應用。 選取多個不同的電荷(N/P)比,制備PAMAM/DNA復合物,瓊脂糖凝膠電泳結果表明,PAMAM G4及PAMAM G5都能夠與DNA形成復合物。酶切保護實驗結果表明,形成復合物后,DNA不被核酸酶降解,即PAMAM能夠有效保護所攜帶的DNA分子不被降解。為進一步探索PAMAM的細胞毒性,分別選取了HEK293細胞、HepG2細胞、U251細胞及A549細胞進行毒性實驗。結果表明,對于同種細胞系PAMAM G5的細胞毒性高于PAMAM G4的細胞毒性。PAMAMG4 48 h的半抑制率在0.1μg/μL,而PAMAM G5 48 h的半抑制率在0.05μg/μL。對于同一種PAMAM載體,隨著濃度的增加毒性增大,細胞毒性呈現(xiàn)劑量依賴性。細胞凋亡實驗結果表明,PAMAM在加入24 h后能夠?qū)е乱恍┘毎麎乃阑蛲砥诘蛲?早期凋亡現(xiàn)象不明顯,同時,細胞壞死或晚期凋亡程度也呈現(xiàn)劑量依賴性,與MTT檢測結果一致。在以上實驗的基礎上,選取N/P比為10：1作為免疫小鼠實驗制備PAMAM/DNA復合物的標準。小鼠免疫實驗初步結果表明經(jīng)腿部肌肉注射PAMAM/DNA復合物,小鼠產(chǎn)生相應抗體。
[Abstract]:DNA vaccine can stimulate the production of cellular and humoral immunity, which is low cost, easy to store and transport. However, the naked DNA vaccine is easy to be hydrolyzed by enzyme during its transport in vivo. Can't cause enough immunogenicity. It is difficult to achieve good immuno-protective effect. DNA delivery vector can protect DNA molecule from hydrolysis by enzyme. In this study, polyamide-amine PamAm dendrimer was selected as gene vaccine delivery vector. The cytotoxicity of PAMAM G4 and PAMAM G5 in various cell lines was studied by cytotoxicity test and apoptosis test. On this basis, the dendritic compound was preliminarily explored as a human respiratory syncytial virus of human respiratory syncytial virus. The application of RSV-based gene vaccine vector in animal models. PAMAM/DNA complexes were prepared with different charge N / P ratios. The results of agarose gel electrophoresis showed that N- / P-. Both PAMAM G4 and PAMAM G5 could form complexes with DNA. In order to further explore the cytotoxicity of PAMAM, HEK293 cell line HepG2 cells were selected. The toxicity of U251 cells and A549 cells was tested. The cytotoxicity of the same cell line PAMAM G5 was higher than that of PAMAMG4. The half inhibition rate of PAMAMG4 for 48 h was 0.1 渭 g / 渭 L. The semi-inhibition rate of PAMAM G548 h was 0.05 渭 g / 渭 L. for the same PAMAM carrier, the toxicity increased with the increase of concentration. The results of apoptosis assay showed that PAMAM could lead to necrosis or late apoptosis of some cells after 24 h, but the early apoptosis was not obvious at the same time. The degree of cell necrosis or late apoptosis was also in a dose-dependent manner, which was consistent with the results of MTT. The N- / P ratio of 10: 1 was selected as the standard for the preparation of PAMAM/DNA complexes in mice. The preliminary results of mouse immunological tests showed that the PAMAM/DNA complexes were injected intramuscularly through the legs. The corresponding antibody was produced in mice.
【學位授予單位】：北京交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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本文編號：1474042