本文關(guān)鍵詞： LDLR基因缺失小鼠 AS 肝組織 RT-PCR 脂代謝 炎癥 糖代謝　出處：《山東師范大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是指動脈內(nèi)膜發(fā)生脂質(zhì)等成分的沉積,平滑肌細(xì)胞(smoothmusclecell, SMC)及膠原纖維增生,并或伴有壞死及鈣化等不同程度病變的慢性進(jìn)行性病理過程。該病變可導(dǎo)致管壁增厚變硬、失去彈性,由于明顯的內(nèi)膜粥樣硬化斑塊,使血管管腔縮小,嚴(yán)重者可導(dǎo)致斑塊破裂、血栓形成,最終可導(dǎo)致管腔閉塞。AS的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,從血脂代謝紊亂、內(nèi)皮細(xì)胞損傷、炎癥細(xì)胞侵入、泡沫細(xì)胞形成、SMC游走增殖,到脂紋、纖維斑塊乃至粥樣斑塊的形成過程中起著決定性的作用。涉及到一系列相關(guān)基因的表達(dá)變化。目前對AS的早期發(fā)病機(jī)制還不明確,往往是血脂異常、糖代謝失衡、炎癥等多種危險(xiǎn)因素并存,共同影響著AS的發(fā)生發(fā)展。有許多關(guān)于AS的學(xué)說,目前傾向于將這些假說綜合起來,每個假說則反映了AS發(fā)生過程中的各個環(huán)節(jié)。在特定的情況下,其中的一個環(huán)節(jié)占主導(dǎo)地位。動脈粥樣硬化的發(fā)生有多種危險(xiǎn)因素,其中脂代謝紊亂導(dǎo)致的血脂異常是AS發(fā)生發(fā)展的重要基礎(chǔ)。低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor, LDLR)是一種細(xì)胞膜表面的糖蛋白,在膽固醇和甘油三脂(triglyceride, TG)的轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要作用。已知編碼LDLR的基因缺陷,可導(dǎo)致高膽固醇血癥。LDLR基因缺失(LDLR-/-)小鼠可在普通飲食下自發(fā)產(chǎn)生內(nèi)膜脂質(zhì)沉積,且與人AS各階段病理特征非常相似,病變部位也極其吻合。目前,國內(nèi)外研究主要側(cè)重于脂代謝相關(guān)基因敲除、抑制或過表達(dá)后對AS的影響,而對AS發(fā)病前期和早期的脂代謝相關(guān)基因表達(dá)變化報(bào)道不多。我們以幼齡LDLR-/-小鼠為研究對象,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測AS發(fā)病前期和早期肝臟中脂代謝、炎癥和糖代謝相關(guān)基因時(shí)序表達(dá)情況,同時(shí)結(jié)合血生化指標(biāo)及主動脈的病理學(xué)觀察,著重探討AS發(fā)病前期和早期脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)變化規(guī)律及其與血脂紊亂乃至AS的關(guān)系。 結(jié)果顯示: 1、基因表達(dá)變化特征:所檢測的14條脂代謝相關(guān)基因中,與同齡野生型(WT)小鼠相比,LDLR-/-小鼠肝臟中載脂蛋白AIV(apolipoprotein AIV, apoAIV)、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(fatty acid transporter, FAT/CD36)、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I(carnitine palmitoyl transferase I, CPT I)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)、和清道夫受體A(scavenger receptor class A, SR-A)的mRNA水平在14天齡時(shí)就顯著下調(diào)(P0.05);30天齡時(shí)載脂蛋白A(Iapolipoprotein AI, apoAI)顯著上調(diào),載脂蛋白F(apolipoprotein F, apoF)顯著下調(diào)(P0.05);60天齡時(shí),肝X受體α(liver X receptorα, LXRα)顯著升高(P0.05);�；o酶A氧化酶1(acyl-coenzymeA oxidase 1, ACOX 1)在90天齡顯著下調(diào)(P0.05);載脂蛋AV(apolipoproteinAV, apoAV)、載脂蛋白E(apolipoproteinE, apoE)、過氧化物增殖物激活型受體α(peroxidase proliferator-activated receptorα, PPARα)、血管生成素樣蛋白3(angiopoietin-like protein 3, Angptl 3)和硬脂�；o酶A脫氫酶1(Stearoyl-CoA desaturase-1, SCD1)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 所檢測的4條炎癥相關(guān)基因中,LDLR-/-小鼠與WT小鼠相比,白蛋白(albumin)基因在60天齡時(shí)表達(dá)顯著升高(P0.05);非受體酪氨酸激酶1(janus kinase-1, JAK-1)基因在14和30天齡顯著下調(diào)(P0.05);C-反應(yīng)蛋白(c-reation protein, CRP)和甘露糖結(jié)合凝集素(Mannan-binding lectin, MBL)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 所檢測的2條糖代謝相關(guān)基因中,LDLR-/-小鼠與WT小鼠相比,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase, PEPCK)和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B(Protein Kinase B, Akt / PKB)mRNA表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.血生化指標(biāo)檢測:LDLR-/-小鼠血清總膽固醇(totle cholesterol, TC)、TG和低密度脂蛋白-膽固醇(Low Density Lipoprotein-Cholesterol, LDL-C)含量從14天齡時(shí)就顯著高于同齡WT小鼠(均P0.05),并隨年齡增長持續(xù)升高。TC和LDL-C水平分別比同齡WT小鼠升高約4倍和10倍,并一直維持于較高水平。TG水平約高于同齡WT小鼠3倍,高密度脂蛋白-膽固醇(High Density Lipoprotein-Cholesterol, HDL-C)也較同齡WT小鼠高出2倍。 3.主動脈根部內(nèi)膜形態(tài)變化:光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),LDLR-/-小鼠在30天齡時(shí)主動脈內(nèi)膜有輕微的脂質(zhì)沉積;60天齡時(shí)瓣膜區(qū)出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)沉積,脂質(zhì)沉積程度明顯加重;90天齡時(shí)能觀察到較為嚴(yán)重的脂質(zhì)沉積,蘇丹IV染色陽性區(qū)域增大。14天齡時(shí)的LDLR-/-小鼠和各個年齡段的WT小鼠主動脈根部內(nèi)膜均未見明顯的脂質(zhì)沉積。 上述脂代謝相關(guān)基因在幼齡小鼠即發(fā)生表達(dá)水平的改變,與血脂紊亂及主動脈病變發(fā)生過程呈現(xiàn)正相關(guān),說明其可能共同參與幼齡小鼠的脂質(zhì)代謝紊亂,進(jìn)而影響動脈內(nèi)皮細(xì)胞功能改變乃至AS早期病變的發(fā)生。
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【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R363

【引證文獻(xiàn)】

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1 蔣越;高運(yùn)臻;何侃;俞沛初;潘玉春;;遺傳與營養(yǎng)因素對豬LDLR與SCD基因表達(dá)的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版);2010年04期

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本文編號：1471996