發(fā)布時(shí)間：2018-01-28 23:12

  本文關(guān)鍵詞： 核酸疫苗 乙型肝炎 表面抗原中蛋白 初免-加強(qiáng)免疫策略　出處：《現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》2009年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:觀察核酸疫苗預(yù)敏,乙型肝炎病毒HBsAg蛋白疫苗增強(qiáng)的免疫對(duì)Balb/c小鼠免疫應(yīng)答的影響。方法:以Transfection TM脂質(zhì)體將乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗pSW3891/MHBs/ad(r簡(jiǎn)稱為adr),及空載體pSW3891(簡(jiǎn)稱vector)體外轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。免疫印跡法(Westernblot)檢測(cè)adr,vector的體外表達(dá);動(dòng)物體內(nèi)研究選用Balb/c小鼠共18只,每組6只,編號(hào)后隨機(jī)分為3組,即空載體質(zhì)粒組(vector+vector組)、adr核酸疫苗+HBsAg蛋白疫苗(adr+protein組)、HBsAg蛋白疫苗+HBsAg蛋白疫苗(Protein+Protein組);于第0周肌肉注射法分別以vector、adr及HBsAg蛋白疫苗免疫小鼠,于第4周肌內(nèi)注射法分別以vector、HBsAg蛋白疫苗、及HBsAg蛋白疫苗免疫小鼠。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)小鼠血清HBsAg特異性抗體、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(ELISPOT)法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞HBsAg多肽特異性IFN-γ分泌細(xì)胞。結(jié)果:adr體外轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后,能夠表達(dá)乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs);體內(nèi)研究結(jié)果顯示:除vector+vector組外,adr+protein組、Protein+Protein組小鼠均能檢出血清抗-HBs,Protein+Protein組抗-HBs終點(diǎn)滴度比adr+protein組高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組中vector+vector組沒有檢測(cè)到特異性INF-γ分泌的脾細(xì)胞,而adr+protein組、Protein+Protein組小鼠均能檢出,且adr+protein組特異性細(xì)胞數(shù)量顯著高于protein+protein組(P0.001),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗預(yù)敏,能明顯增強(qiáng)Balb/c小鼠對(duì)乙型肝炎HBsAg蛋白疫苗細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。
[Abstract]:Objective: to observe the presensitivity of nucleic acid vaccine. Effect of hepatitis B virus HBsAg protein vaccine enhanced immunization on immune response in Balb/c mice. Methods: Transfection. TM liposomes expressed hepatitis B virus surface antigen proteins (. The nucleic acid vaccine pSW3891/MHBs/ad(r is referred to as Adr. for short. And empty vector pSW3891 (vector) was transfected into 293T cells in vitro. Western blotting was used to detect the expression of Adr-vector in vitro. In vivo study, 18 Balb/c mice were selected, 6 mice in each group were randomly divided into 3 groups, that is, vector vector group. Adr nucleic acid vaccine HBsAg protein vaccine HBsAg protein vaccine HBsAg protein vaccine in ADR protein group and protein Protein group; Mice were immunized with vectoradr and HBsAg protein vaccine at week 0 and intramuscular injection with vectorus HBsAg protein vaccine at week 4. HBsAg protein vaccine was used to immunize mice. Elisa was used to detect the specific antibody to HBsAg in serum of mice. The HBsAg polypeptide specific IFN- 緯 secreting cells of mouse spleen cells were detected by enzyme-linked immunoblot assay (Elisa). Results 293T cells were transfected with 10% ADR in vitro. It can express the protein of hepatitis B virus surface antigen (HBsAg). The results of in vivo study showed that serum anti-HBs could be detected in all mice except vector vector group, ADR protein group and protein Protein group. The titer of anti-HBs in Protein Protein group was higher than that in adr protein group, but there was no statistical significance. No specific INF- 緯 secreted splenocytes were detected in the vector vector group, while in the adr protein group, no specific INF- 緯 secreted spleen cells were detected in the three groups. All the mice in Protein Protein group could be detected. The number of specific cells in adr protein group was significantly higher than that in protein protein group (P 0.001). Conclusion: hepatitis B virus surface antigen protein MHBsAg) nucleic acid vaccine presensitive. It can obviously enhance the cellular immune response of Balb/c mice to hepatitis B HBsAg protein vaccine.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科;美國馬薩諸塞州大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(30371276) 135重點(diǎn)人才基金項(xiàng)目(135-044)
【分類號(hào)】：R392;R512.6
【正文快照】： 前言特異性細(xì)胞免疫功能低下是慢性乙型肝炎的主要致病機(jī)制之一[1],核酸疫苗能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答而具有潛在治療價(jià)值,有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HBsAg核酸疫苗能刺激宿主產(chǎn)生一定強(qiáng)度的特異性免疫應(yīng)答[2-4],但目前存在的一個(gè)明顯問題是動(dòng)物越大,DNA疫苗的免疫效力越低[5-

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