本文關(guān)鍵詞：一種新型致真菌性足菌腫的馬杜拉分支菌TMMU3956的表型及分子特征　出處：《第三軍醫(yī)大學》2009年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 足菌腫是一種熱帶或亞熱帶疾病,該病的世界分布極其不均,南緯15?和北緯30?之間的區(qū)域為足菌腫高發(fā)區(qū),尤以南亞的印度、非洲的蘇丹和南美的墨西哥發(fā)病率為最高。據(jù)蘇丹喀土穆中心醫(yī)院的保守統(tǒng)計,足菌腫的就診率大約在300~400人/年度。而地處溫帶和寒帶的國家發(fā)病率較低,罕見于中國。據(jù)不完全統(tǒng)計,1960~2009這半個世紀以來,我國共有足菌腫的報道18例,發(fā)病率不足1人/年度。 足菌腫可發(fā)生于全身任何部位,其中以足部最多見,約占70%,其次為手、四肢、肩背、臀部、會陰。一些罕見部位如胸腹壁、睪丸、女陰、腭部、眼瞼、眶內(nèi)、鼻旁竇、腦、肺、脊柱、膽囊、手術(shù)切口處也有報道。頭頸部足菌腫的發(fā)生率為3.75%,一個無法解釋的現(xiàn)象是:發(fā)生在頭面部的足菌腫,80%由放線菌引起,僅有不足20%由真菌引起。盡管頭頸部足菌腫發(fā)病率低,但后果嚴重且非常難以治療。 根據(jù)致病菌種類的不同,足菌腫分為真菌性足菌腫和放線菌性足菌腫兩種。馬杜拉分支菌是真菌性足菌腫最常見的致病菌,已知的致病菌種有兩種:足菌腫馬杜拉分支菌和灰色馬杜拉分支菌。足菌腫馬杜拉分支菌在過去一直被認為是同質(zhì)的,不存在多態(tài)現(xiàn)象。但是,隨著分子生物學的發(fā)展,越來越多的證據(jù)表明足菌腫馬杜拉分支菌和灰色馬杜拉分支菌的異質(zhì)現(xiàn)象非常明顯,很有可能存在其它菌種。系統(tǒng)進化分析甚至顯示足菌腫馬杜拉分支菌和灰色馬杜拉分支菌的進化距離很遠,極大可能不屬于一個種屬。 本課題報道了重慶地區(qū)一例罕見的發(fā)生在下頜部的真菌性足菌腫,研究該病例的意義不僅在于它發(fā)病部位的特殊性和地域的罕見性,更重要的是我們從患者下頜部黑色顆粒中分離到一株國內(nèi)罕見的暗色真菌,常規(guī)真菌學無法判知其種屬。經(jīng)ITS區(qū)測序發(fā)現(xiàn),該真菌與足菌腫馬杜拉分支菌有最大的相似性,但相似性小于95%,極大可能是馬杜拉分支菌屬一新的菌種,菌株編號為TMMU3956。 鑒于馬杜拉分支菌混亂的分類學范疇,本研究的目的在于獲得TMMU3956詳盡的形態(tài)學、理化特性、藥物敏感性、動物致病性和分子生物學等方面的資料,為證明它是馬杜拉分支菌屬一新的菌種提供證據(jù),并對馬杜拉分支菌的進化起源和分類學進行探討。 我們以TMMU3956為研究對象,將菌株接種在沙堡氏培養(yǎng)基(SDA)、馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)、腦心浸膏培養(yǎng)基(BHIA)、察氏培養(yǎng)基(CDA)和玉米培養(yǎng)基(CMA)上行平皿培養(yǎng)和玻片培養(yǎng),8周后觀察菌落宏觀形態(tài)和光鏡、掃描電鏡下微觀形態(tài)。行溫度試驗、同化試驗觀察其理化特性。采用改良的美國臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)M-38A方案對TMMU3956進行體外藥敏試驗,測試藥物包括氟康唑、氟胞嘧啶、伊曲康唑、兩性霉素B、特比萘芬和伏立康唑。玻璃珠-鹽析法提取TMMU3956的DNA,使用通用引物和足菌腫馬杜拉分支菌特異性引物擴增真菌的ITS1、ITS2、D1/D2、18S和ITS1+2區(qū),測序后進行BLAST,并選取有代表性的40種真菌性足菌腫致病菌行系統(tǒng)進化分析。最后用TMMU3956感染免疫正常的和免疫抑制的BALB/c小鼠和新西蘭大白兔,觀察動物致病性。 結(jié)果顯示:光鏡與電鏡下,該真菌至少觀察到兩種無性繁殖方式:瓶梗產(chǎn)孢和孢子囊孢子產(chǎn)孢。最佳生長溫度為37℃,最高耐熱溫度為42℃。能同化葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、纖維二糖、麥芽糖、海藻糖。對伊曲康唑、兩性霉素B、伏立康唑高度敏感,特比萘芬中度敏感,對氟胞嘧啶和氟康唑耐藥。未檢測到BALB/c小鼠和新西蘭大白兔致病性。18S和ITS1+2區(qū)與足菌腫馬杜拉分支菌的相似性分別為100%和93%,足菌腫馬杜拉分支菌特異性探針無法擴增TMMMU3956。系統(tǒng)進化分析顯示TMMU3956與足菌腫馬杜拉分支菌遺傳距離最近,同屬于子囊菌門核菌綱;而灰色馬杜拉分支菌屬于子囊菌門腔菌綱,與TMMU3956相去甚遠。 根據(jù)TMMU3956的形態(tài)學、理化特性、rDNA的序列分析及系統(tǒng)進化分析,我們認為該菌株有別于足菌腫馬杜拉分支菌和灰色馬杜拉分支菌,支持該菌株為馬杜拉分支菌屬一新的致病菌種。
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【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R379

【參考文獻】

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