本文關(guān)鍵詞：全肝缺血再灌注后心肌及線粒體損傷的機制及防護　出處：《中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 背景與目的:肝臟移植術(shù),肝臟大部切除術(shù)臨床上極為常見,手術(shù)技術(shù)相當(dāng)成熟,但術(shù)中需要阻斷下腔靜脈,門靜脈及肝動脈的血流,手術(shù)過程復(fù)雜,造成全肝缺血再灌注損傷,不僅影響肝臟本身功能,對遠隔臟器-心臟也會造成損傷。全肝缺血再灌注引起心臟損傷的的病理生理機制,至今尚未完全闡明。 本實驗用手術(shù)的方法建立大鼠的全肝缺血再灌注模型,動態(tài)檢測血漿H_2S、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮(aldosterone,ALD)及血清心肌肌酸激酶同功酶(MB isoenzyme ofcreatine kinase,CK-MB)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)的變化,檢測心肌CSE活性及ALD、NF-kB含量,并用RT-PCR的方法檢測心肌CaNmRNA及ALDH2mRNA的表達,觀察心肌組織CaN Aβ基因及ALDH2基因表達的變化,同時光鏡下觀察心肌的病理損傷,電鏡觀察心肌線粒體形態(tài)和結(jié)構(gòu)的變化。并應(yīng)用H_2S供體NaHS、CaN抑制劑FK506、醛固酮拮抗劑螺內(nèi)酯及激素甲基強的松龍(methylprednisolone,MP)進行干預(yù),觀察上述指標及線粒體琥珀酸脫氫酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性、Ca~(2+)-ATPase及Na~+/K~+-ATPase的活性變化,進一步研究H_2S、CaN、醛固酮及激素在全肝缺血再灌注心肌損傷中的信號傳導(dǎo)機制及各信號通路之間的相互作用,同時研究H_2S、CaN抑制劑FK506、醛固酮受體拮抗劑螺內(nèi)酯及激素對心血管系統(tǒng)的保護作用。 本研究分為三部分:一、全肝缺血再灌注心肌損傷的機理研究;二、全肝缺血再灌注后心肌損傷的保護及其保護機理研究;三、全肝缺血再灌注后心肌損傷的線粒體機制及其干預(yù)研究。 方法:本實驗用手術(shù)的方法建立大鼠的全肝缺血再灌注模型。第一部分實驗分組:雄性Wistar大鼠88只,隨機分為11組,每組8只:正常對照組;缺血20min組;缺血40min組;缺血20min再灌注2h組;缺血20min再灌注6h組;缺血20min再灌注12h組;缺血20min再灌注24h組;缺血20min再灌注48h組;缺血20min再灌注72h組;缺血40min再灌注6h組;缺血40min再灌注72h組。第二部分實驗分組:雄性Wistar大鼠128只,隨機分為16組,每組8只:正常對照組;缺血20min再灌注6h組;缺血40min再灌注6h組;缺血40min再灌注72h組;缺血20minFK506組:再通后立即給予腹腔注射FK506(0.1mg/kg);缺血20min NaHS組:再通后立即給予腹腔注射NaHS(28μmol/kg);缺血20min MP組:再通后立即給予腹腔注射MP(30mg/kg);缺血20min螺內(nèi)酯組:螺內(nèi)酯每天灌胃(20mg/kg),6天后手術(shù);FK506組:假手術(shù)后給予腹腔注射FK506(0.1mg/kg);NaHS組:假手術(shù)后立即給予腹腔注射NaHS(28μmol/kg);MP組:假手術(shù)后立即給予腹腔注射MP(30mg/kg);螺內(nèi)酯組:螺內(nèi)酯每天灌胃(20mg/kg)持續(xù)6天后假手術(shù);缺血40 min再灌注6h MP組:再通后立即給予腹腔注射MP(30mg/kg),再灌后6h處死;缺血40 min再灌注6h螺內(nèi)酯組:螺內(nèi)酯術(shù)前6天每天灌胃(20mg/kg),再灌注后6h處死;缺血40 min再灌注72h MP組:再通后立即給予腹腔注射MP(30mg/kg),再灌后72h處死;缺血40 min再灌注72h螺內(nèi)酯組:螺內(nèi)酯術(shù)前6天每天灌胃(20mg/kg),再灌后72h處死。再通后觀察各組大鼠心肌病理、血漿H_2S、MDA、AngⅡ、ALD、TNF-α的變化,血清CK-MB、LDH的變化,同時檢測各組大鼠心肌CSE活性、ALD、NF-kB含量;并用RT-PCR的方法檢測心肌CaN mRNA、ALDH2 mRNA的表達。第三部分實驗動物為80只雄性Wistar大鼠,隨機分為10組,每組8只:正常對照組;缺血20min再灌注6h組;FK506組:假手術(shù)后給予腹腔注射FK506(0.1mg/kg);NaHS組:假手術(shù)后立即給予腹腔注射NaHS(28μmol/kg);MP組:假手術(shù)后立即給予腹腔注射MP(30mg/kg);螺內(nèi)酯組:螺內(nèi)酯每天灌胃(20mg/kg)持續(xù)6天后假手術(shù);FK506干預(yù)組:再通后立即給予腹腔注射FK506(0.1mg/kg);NaHS干預(yù)組:再通后立即給予腹腔注射NaHS(28μmol/kg);缺血20min MP干預(yù)組:再通后立即給予腹腔注射MP(30mg/kg);缺血20min螺內(nèi)酯干預(yù)組:螺內(nèi)酯每天灌胃(20mg/kg),6天后手術(shù)。觀察心肌線粒體膜電位、呼吸功能、SDH活性、Ca~(2+)-ATPase及Na~+/K~+-ATPase的活性變化。 結(jié)果:第一部分結(jié)果:與正常對照組比較,血漿MDA、血清TNF-α在缺血20min即有明顯升高,再灌注后6h達高峰,其后雖有所下降,但仍維持在較高水平。血漿H_2S于缺血20min開始明顯下降,再灌注后2h開始升高,6h達最高峰,至再灌注后72h逐漸恢復(fù)。而心肌CSE酶活性的變化稍晚于血漿H_2S,于創(chuàng)傷后12h最低,72h后才逐漸恢復(fù)。第二部分結(jié)果:與全肝缺血再灌注組比,四種干預(yù)藥物血MDA、TNF-α、心肌NF-kB、ICAM-1含量均降低,NaHS組血漿H_2S含量增加,余藥物干預(yù)組血漿H_2S含量減低,螺內(nèi)酯組與FK506組心肌CSE酶變化不明顯,余藥物干預(yù)組下降。第三部分結(jié)果:與正常對照組比,缺血20min再灌注6h組線粒體呼吸功能下降,RCR及P/O明顯降低,Na~+/K~+ATP酶,SDH酶及膜電位下降,Ca~(2+)-ATP酶含量升高。與缺血20min再灌注6h組比較,NaHS組、FK506組、MP組心肌線粒體呼吸功能明顯改善,RCR、P/O及Na~+/K~+ ATP酶,SDH酶含量增加,Ca~(2+)-ATP酶含量升高,膜電位升高。與缺血20min再灌注6h組組比,螺內(nèi)酯組線粒體RCR、Na~+/K~+-ATP酶、SDH酶及膜電位增加,Ca~(2+)-ATP酶減少。 結(jié)論:全肝缺血再灌注后可以造成遠隔的心臟及線粒體損傷,全肝缺血再灌注后2～6小時,心肌損傷最重。炎細胞及炎性細胞因子的活化、過度的氧化應(yīng)激、CaN信號通路及內(nèi)源性血漿H_2S/心肌CSE體系均參與了全肝缺血再灌注后心肌損傷。外源性H_2S補充及CaN抑制劑FK506可以通過降低炎細胞浸潤及炎性細胞因子激活、直接清除氧自由基、增加心肌線粒體呼吸功能、提高膜電位及線粒體ATP酶產(chǎn)量,對心肌損傷發(fā)揮保護作用。CaN信號通路及氣體信號通路相互作用共同調(diào)節(jié)全肝缺血再灌注后的心肌及線粒體損傷。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : The liver transplantation and liver resection are very common and the operation technique is quite mature . However , it is necessary to block the blood flow of inferior vena cava , portal vein and hepatic artery . The effects of H _ 2S , CaN , aldosterone and hormone on myocardial mitochondrial morphology and structure were observed . The effects of H _ 2S , CaN , aldosterone and hormone on cardiac mitochondrial membrane morphology and structure were observed . This study is divided into three parts : one , the mechanism of whole liver ischemia reperfusion myocardial injury , the protection of myocardial injury after the whole liver ischemia / reperfusion and its protective mechanism , the mitochondrial mechanism of myocardial injury after the whole liver ischemia and reperfusion and its intervention study .



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本文編號：1425402