本文關(guān)鍵詞：CD63基因在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)和調(diào)節(jié)　出處：《廈門(mén)大學(xué)》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 胚胎著床是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,需要活化的胚泡與進(jìn)入接受態(tài)的子宮內(nèi)膜之間建立聯(lián)系。在嚙齒類(lèi)動(dòng)物,著床過(guò)程啟動(dòng)后,子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞發(fā)生廣泛的蛻膜化,為接下來(lái)的胚胎及胎盤(pán)發(fā)育做準(zhǔn)備。胚胎著床和子宮蛻膜化受到很多因素調(diào)控,但具體的分子機(jī)理仍不清楚。我們實(shí)驗(yàn)室利用基因表達(dá)系列分析(SAGE)技術(shù)發(fā)現(xiàn),與非著床位點(diǎn)相比,CD63(CD63 antigen)基因在小鼠的著床位點(diǎn)顯著上調(diào)。 CD63屬于四次跨膜蛋白超家族,在人黑色素瘤等多種腫瘤發(fā)展中起重要作用,被稱(chēng)為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子。本實(shí)驗(yàn)利用原位雜交、實(shí)時(shí)定量RT-PCR、Westernblot和熒光素酶活性分析等方法,研究了CD63基因在圍著床期小鼠子宮中的表達(dá)與調(diào)節(jié)。CD63的mRNA和蛋白水平在妊娠第5天子宮的著床位點(diǎn)均顯著上調(diào),在隨后第6-8天的蛻膜區(qū),均可檢測(cè)到明顯的CD63 mRNA表達(dá)信號(hào)。在假孕和延遲著床的子宮中,檢測(cè)不到CD63基因的表達(dá),而在延遲激活子宮的著床位點(diǎn),CD63基因的表達(dá)特異性增強(qiáng),其表達(dá)模式與正常妊娠第5天著床位點(diǎn)處類(lèi)似。CD63 mRNA在小鼠妊娠第6-8天的蛻膜區(qū)表達(dá),同時(shí)在人工誘導(dǎo)蛻膜化的小鼠子宮中也能檢測(cè)到CD63基因的雜交信號(hào),實(shí)時(shí)定量RT-PCR也驗(yàn)證了此結(jié)果,提示CD63基因可能在蛻膜化過(guò)程發(fā)揮作用。在切除卵巢的小鼠中,類(lèi)固醇激素對(duì)CD63在子宮內(nèi)的表達(dá)沒(méi)有影響。體外誘導(dǎo)蛻膜化中,CD63 mRNA表達(dá)持續(xù)上調(diào)。CD63基因啟動(dòng)子上存在轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ反應(yīng)元件,將含有CD63基因啟動(dòng)子序列的報(bào)告載體轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和NIH-3T3細(xì)胞后,通過(guò)熒光素酶活性分析,表明C/EBPβ能夠顯著增加CD63基因的轉(zhuǎn)錄活性。 總之,CD63基因在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)與胚胎著床過(guò)程密切相關(guān),并受活性胚泡的誘導(dǎo)。CD63基因在小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞體外蛻膜化過(guò)程中表達(dá)上調(diào)。此外,轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ上調(diào)CD63基因的轉(zhuǎn)錄活性。
[Abstract]:Embryo implantation is a complex process, which needs to establish a connection between the activated blastocyst and the recipient endometrium. In rodents, after implantation, the endometrial stromal cells undergo extensive decidualization. Prepare for subsequent embryo and placental development. Embryo implantation and uterine decidualization are regulated by many factors. But the specific molecular mechanism is still unclear. Our laboratory using gene expression series analysis of SAGE-based technology found that compared with non-implantation sites. CD63(CD63 antigenin gene was significantly up-regulated in mouse implantation site. CD63 belongs to the four-time transmembrane protein superfamily, and plays an important role in the development of human melanoma and other tumors, known as tumor metastasis suppressor. In this experiment, in situ hybridization, real-time quantitative RT-PCR. Methods of Westernblot and luciferase activity analysis. To study the expression and regulation of mRNA and protein of CD63 gene in the uterus of surrounding mice, the implantation sites of mRNA and CD63 were significantly up-regulated on the 5th day of pregnancy. The expression of CD63 mRNA was detected in decidua from the 6th to 8th day, and the expression of CD63 gene was not detected in pseudopregnancy and delayed implantation uterus. The expression of CD63 gene was specifically enhanced at the locus loci of delayed activation of uterus. The expression pattern of CD63 mRNA was similar to that at the implantation site on the 5th day of gestation in mouse decidua on the 6th and 8th day of gestation. At the same time, the hybridization signal of CD63 gene could also be detected in the mouse uterus induced by artificial decidualization, and the results were verified by real-time quantitative RT-PCR. These results suggest that CD63 gene may play a role in decidualization. Steroid hormones have no effect on the expression of CD63 in uterus in ovariectomized mice. The expression of CD63 mRNA continued to up-regulate. There were transcription factor C / EBP 尾 response elements on the promoter of CD63 gene. The reporter vector containing promoter sequence of CD63 gene was transfected into endometrial stromal cells and NIH-3T3 cells in vitro, and luciferase activity was analyzed. The results showed that C / EBP 尾 could significantly increase the transcriptional activity of CD63 gene. In conclusion, the expression of CD63 gene in mouse uterus is closely related to the implantation process. The expression of CD63 gene was up-regulated in mouse uterine stromal cells during decidualization in vitro, and the transcription factor C / EBP 尾 upregulated the transcriptional activity of CD63 gene.
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R321;Q492

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1410400