本文關(guān)鍵詞：異源反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)輸血相關(guān)免疫抑制作用的初步研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的意義:同種異基因的血液輸注會(huì)導(dǎo)致受血者免疫狀態(tài)發(fā)生改變,這在臨床輸血學(xué)文獻(xiàn)資料中被稱為輸血相關(guān)性免疫調(diào)節(jié)(transfusion-associated immunomodulation, TRIM)。在輸血相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)中,自然殺傷(Natural killer, NK)細(xì)胞是重要的一環(huán)。位于NK細(xì)胞表面的殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(Killer cell immunoglobulin-like receptor, KIR)能夠特異性識(shí)別并結(jié)合靶細(xì)胞表面的HLA-Ⅰ類分子,傳導(dǎo)抑制或激活信號(hào),如同一套有效的開關(guān)系統(tǒng),調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的殺傷功能,在抗感染、抗腫瘤等方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用。KIR分為抑制型(DL)和活化型(DS)兩組,每一組均有其特定的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域,且均與特定的配體結(jié)合,分別介導(dǎo)抑制性或活化性反應(yīng)。KIR特異性識(shí)別不同的HLA分子,KIR2DLl/2DS1識(shí)別HLA-Cw2、Cw4、Cw5、Cw6、Cw15,其共同特點(diǎn)是HLA第80位氨基酸殘基為賴氨酸;KIR2DL2、2DL3/2DS2、2DS3識(shí)別HLA-Cw1、Cw3、Cw7、Cw8、Cw12、Cw14,其共同特點(diǎn)是HLA第80位氨基酸殘基為天門冬氨酸;KIR3DL1識(shí)別HLA-Bw4,3DL2識(shí)別HLA-A3/-A11;2DL4識(shí)別HLA-G;其余的KIR配體尚未明確。當(dāng)KIR不能識(shí)別來(lái)自不同個(gè)體的HLA-I類分子時(shí)就會(huì)產(chǎn)生異源反應(yīng)性,反之當(dāng)KIR能夠識(shí)別來(lái)自不同個(gè)體的HLA-I類分子時(shí)就會(huì)產(chǎn)生免疫耐受。目前大部分研究都是從NK細(xì)胞的數(shù)量和活性方面的變化入手,異體輸血引起NK細(xì)胞數(shù)量和活性被動(dòng)地降低,對(duì)于主動(dòng)發(fā)揮NK細(xì)胞的作用方面沒有涉及。異源反應(yīng)性NK細(xì)胞(Alloreactive natural killer cell)概念的出現(xiàn),為輸血相關(guān)免疫抑制的預(yù)防和逆轉(zhuǎn)提供了新的思路。截止目前,NK細(xì)胞的異源性反應(yīng)在TRIM中的作用研究尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。借鑒NK細(xì)胞在造血干細(xì)胞移植中應(yīng)用的研究經(jīng)驗(yàn),我們提出這樣的設(shè)想:像交叉配血一樣,在輸血前做KIR和HLA -I類分子配型,選擇與受血者HLA- I類分子不匹配KIR的供血者,產(chǎn)生NK細(xì)胞的異源性反應(yīng),預(yù)防或逆轉(zhuǎn)免疫抑制狀態(tài),用于腫瘤、血液病和移植病人的常規(guī)輸血和個(gè)體化輸血治療。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床輸血,旨在探討當(dāng)供血者的KIR與受血者HLA- I類分子不同程度匹配情況下,異源性反應(yīng)NK細(xì)胞對(duì)輸血相關(guān)免疫抑制的作用。 材料和方法:采用miniMACS免疫磁珠分選方法,從外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中得到純化的NK細(xì)胞,隨后在特定的條件下進(jìn)行體外培養(yǎng),并采用PCR-SSP法對(duì)此外周血進(jìn)行5種KIR抑制基因的分型。將已經(jīng)KIR分型的NK細(xì)胞與已知HLA分型的血液病病人骨髓移植供者的全血按一定比例(相當(dāng)于60公斤體重個(gè)體輸入800ml全血)混合,分不同時(shí)間點(diǎn)取樣檢測(cè)不同免疫指標(biāo)的變化。實(shí)驗(yàn)共20組,根據(jù)KIR和HLA的不相合程度進(jìn)行分析,比較不同相合程度對(duì)血液免疫功能的影響。 結(jié)果:經(jīng)免疫磁珠分離方法可以得到較高純度的NK細(xì)胞,由分離前的13.8±2.24%提高到分離后的94.5±2.61%,細(xì)胞存活率平均值95%。培養(yǎng)21d,細(xì)胞增殖最多擴(kuò)增了13倍,第7-15d細(xì)胞增殖速度較快,在培養(yǎng)第14d效靶比為10:1時(shí)殺傷活性最高,能達(dá)到94%。通過對(duì)不同KIR和HLA的不相合組免疫指標(biāo)的分析發(fā)現(xiàn):從0h到24h,IL-2、IL-4、PGE2、TNF-α、TNF-β、IFN-γ、GM-CSF的濃度都隨時(shí)間的增加而增加(P0.05),IgA、IgM、IgG的濃度都隨時(shí)間的增加而減少(P0.05);KIR與HLA不相合程度的不同與IL-2、IL-4、PGE2、IgA、IgM、IgG濃度無(wú)關(guān)(P0.05),TNF-α、TNF-β、IFN-γ、GM-CSF的濃度隨著KIR與HLA不相合程度的加大而增加(P0.05)。 結(jié)論:KIR與HLA不相合程度越高越能激發(fā)異源反應(yīng)性NK細(xì)胞的免疫功能,這將能更好的逆轉(zhuǎn)輸血相關(guān)免疫抑制作用。
[Abstract]:Objective : Blood infusion of allogene can cause changes in immune status of recipients , which is called transfusion - associated immunomodulation ( TRIM ) in clinical transfusion literature . KIR3DL1 recognizes HLA - Cw2 , Cw4 , Cw7 , Cw8 , Cw12 , Cw14 . Materials and Methods : The purified NK cells were isolated from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) by miniMACS immunomagnetic bead sorting method . Results : NK cells with higher purity were obtained by immunomagnetic bead separation method . The results showed that the concentration of IL - 2 , IL - 4 , PGE2 , TNF - 偽 , TNF - 尾 , IFN - 緯 and GM - CSF increased with the increase of time ( P0.05 ) . Conclusion : The higher the level of KIR and HLA , the higher the immune function of NK cells can be activated .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1410298