本文關鍵詞：克里米亞—剛果出血熱病毒核衣殼蛋白和糖蛋白分段表達及抗原表位鑒定　出處：《新疆大學》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 克里米亞-剛果出血熱(Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF)是一種存在于中國新疆塔里木盆地和準噶爾盆地、俄羅斯北部、中東、南部歐亞大陸及非洲撒哈拉地區(qū)的烈性自然疫源性疾病,發(fā)病具有明顯的季節(jié)性與地方性,其平均病死率在10%-50%。該病的病原是經(jīng)蜱傳播的克里米亞-剛果出血熱病毒(CCHFV)。該病毒屬于布尼亞病毒科內(nèi)羅病毒屬,是一種單股負鏈RNA病毒。目前,還沒有有效的針對CCHF的預防和治療手段。 本研究利用DNA重組技術將克里米亞-剛果出血熱病毒YL04057株S片段上的核衣殼蛋白基因(nucleocapsid protein, NP)編碼區(qū)全序列和一系列分段片段克隆入原核表達載體,在大腸桿菌中進行表達,分離純化表達產(chǎn)物,用抗克里米亞-剛果出血熱病毒的多克隆抗體和2株單克隆抗體(14B7和43E5)對各表達產(chǎn)物進行抗原表位的檢測和分析。結(jié)果顯示,含有NP蛋白第235-305位氨基酸的三個表達蛋白片段可以被抗克里米亞-剛果出血熱病毒的多克隆抗體檢測出來,也可以與2株單克隆抗體反應。表明兩株單抗14B7和43E5以及兔多抗所針對的抗原表位均定位在NP蛋白的第235-305位氨基酸區(qū)域,這個區(qū)域也是NP蛋白的一個高度保守的氨基酸區(qū)域。 同時,我們對M片段上的糖蛋白(glycoprotein, GP)編碼區(qū)分段片段克隆入原核表達載體,在大腸桿菌中表達,分離純化表達產(chǎn)物,用抗克里米亞-剛果出血熱病毒的多克隆抗兔抗體對各表達產(chǎn)物進行抗原表位的檢測和分析。結(jié)果顯示,重組分段糖蛋白均不與兔多抗血清反應。CCHFV糖蛋白結(jié)構復雜,而原核表達系統(tǒng)不具有完整的翻譯后修飾功能。由于實驗室制備的多抗血清多是針對核蛋白的,對糖蛋白的檢測缺乏針對性。因此,有必要建立CCHFV糖蛋白的真核表達系統(tǒng),獲得糖蛋白及抗血清,以便于深入開展糖蛋白的研究。 研究確定克里米亞-剛果出血熱病毒結(jié)構蛋白的抗原特性,將有助于克里米亞-剛果出血熱病毒感染與免疫機制的闡明,也將為其亞單位疫苗的研制提供理論基礎。
[Abstract]:Crimean Congo hemorrhagic fever. CCHFs are a kind of severe natural epidemic diseases in Tarim Basin and Junggar Basin, northern Russia, Middle East, southern Eurasia and sub-Saharan Africa. The disease is seasonal and endemic. The average mortality is between 10 and 50. The pathogen of the disease is the Crimean Congo hemorrhagic Fever virus (CCHFV), which is transmitted by ticks. The virus belongs to the genus Conero virus of Bunia virus. It is a single-stranded negative-stranded RNA virus. At present, there is no effective prevention and treatment for CCHF. In this study, nucleocapsid protein, a nucleocapsid protein, was cloned from the S fragment of Crimean Congo hemorrhagic fever virus (YL04057) strain by DNA recombination technique. The whole sequence and a series of fragments of NPN coding region were cloned into prokaryotic expression vector and expressed in Escherichia coli. The expressed product was isolated and purified. The antigenic epitopes of the expressed products were detected and analyzed by polyclonal antibody against Crimean Congo hemorrhagic fever virus and two monoclonal antibodies (mAb 14B7 and 43E5). Three expressed protein fragments containing amino acids at position 235-305 of NP protein can be detected by polyclonal antibodies against Crimean Congo hemorrhagic fever virus. It also showed that the epitopes of the two McAbs 14B7 and 43E5 and rabbit polyantibodies were located in the amino acid region of the 235-305 amino acid of NP protein. This region is also a highly conserved amino acid region of NP protein. At the same time, we cloned the glycoprotein glycoprotein (GP) coding fragment of M fragment into prokaryotic expression vector, expressed in Escherichia coli, isolated and purified the expressed product. The antigenic epitopes of the expressed products were detected and analyzed with polyclonal anti-rabbit antibodies against Crimean Congo hemorrhagic fever virus. The recombinant segmental glycoprotein did not react with rabbit polyantiserum. The structure of CCHFV glycoprotein was complex. But the prokaryotic expression system does not have the complete post-translational modification function. Because the polyclonal antibody serum prepared in the laboratory is aimed at the nucleoprotein, the detection of the glycoprotein is not targeted. It is necessary to establish eukaryotic expression system of CCHFV glycoprotein to obtain glycoprotein and antiserum for further study of glycoprotein. The determination of the antigenic characteristics of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus structural protein will be helpful to clarify the infection and immune mechanism of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus. It will also provide a theoretical basis for the development of its subunit vaccine.
【學位授予單位】：新疆大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R373

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本文編號：1409887