本文關(guān)鍵詞：CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的抗弓形蟲感染保護性免疫應(yīng)答　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的觀察霍亂毒素(cholera toxin, CT)聯(lián)合弓形蟲排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigens, ESA)滴鼻免疫小鼠的黏膜佐劑的適宜劑量以及鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的黏膜及系統(tǒng)免疫應(yīng)答,確定其抗弓形蟲感染的作用。為弓形蟲黏膜疫苗研制提供實驗基礎(chǔ)。 方法分三部分：第一部分觀察不同劑量CT聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠的黏膜佐劑效應(yīng)。5-6周齡BALB/c小鼠60只隨機分為5組,每組12只,分別以O(shè)、0.5、1.0、1.5或2.0μg CT聯(lián)合ESA 20μg滴鼻免疫小鼠,間隔2周免疫2次。末次免疫后30d,觀察小鼠的健康狀況、存活率。眼靜脈叢采血后頸椎脫臼處死全部小鼠,分離脾、Peyer's patch (PP)、腸系膜淋巴結(jié)(MLN)計數(shù)淋巴細胞。用ELISA法檢測血清IgG和糞便slgA水平。 第二部分：觀察CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)黏膜免疫及系統(tǒng)免疫應(yīng)答的效果。5-6周齡BALB/c小鼠48只隨機分為3組,每組16只。分別用PBS 20μl、ESA 20μg或CT 1.0μg+ESA 20μg／只滴鼻免疫小鼠2次,間隔2周。末次免疫后14d,頸椎脫臼處死小鼠,ELISA測定糞便和鼻咽沖洗液slgA抗體水平；計數(shù)PP、腸上皮淋巴細胞(IEL)、鼻相關(guān)淋巴組織(NALT)、鼻通道(NC)淋巴細胞數(shù),免疫細胞化學(xué)法檢測CD4+、CD8+T細胞亞群水平。 第三部分：觀察CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的抗弓形蟲感染作用。6周齡BALB/c小鼠60只,隨機分為3組,每組20只。分別用PBS 20μl、ESA 20μg或CT 1.0μg+ESA20μg／只滴鼻免疫2次,間隔2周。末次免疫后14d,用4×104個弓形蟲速殖子／只灌胃攻擊所有小鼠,觀察小鼠健康及死亡情況。速殖子攻擊后30d,全部小鼠被摘眼球采血后處死,ELISA法檢測血清IgG和糞便slgA,計數(shù)肝、腦組織內(nèi)弓形蟲速殖子,分離并計數(shù)PP和脾淋巴細胞數(shù)。 結(jié)果CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)了MLN、PP和脾淋巴細胞高水平免疫應(yīng)答,并均呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng),顯著高于無佐劑組(P0.05),但較高劑量組(1.0μg、1.5μg和2.0μg)之間無顯著差異(P0.05)。1.0μg CT聯(lián)合ESA鼻內(nèi)免疫小鼠既誘導(dǎo)了較高的黏膜和系統(tǒng)免疫應(yīng)答,又對小鼠的健康沒有不良影響,為適宜劑量。 CT佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效誘導(dǎo)GALT和NALT黏膜部位免疫應(yīng)答。CT佐劑組小鼠鼻咽沖洗液和糞便slgA水平均顯著高于ESA組和PBS組(P0.01),CT佐劑組糞便slgA水平也顯著高于ESA組(P0.01)。CT佐劑組和ESA組小鼠GALT部位的PP淋巴細胞增生顯著(P0.01),主要以CD4+T細胞為主；而IEL以CD8+T細胞增生為主(P0.01),CD4+/CD8+比值降低(P0.05)。CT佐劑組NALT內(nèi)淋巴細胞明顯增生(P0.01),其中CD4+、CD8+T細胞均有增生(P0.01),CD4+/CD8+比值降低(P0.05)。CT佐劑組NC中淋巴細胞數(shù)明顯升高(P0.01),以CD4+T細胞為主(P0.01)。 CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答可有效抵抗弓形蟲速殖子攻擊。CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠的健康狀況明顯好于PBS組和ESA組,存活率(95%)也顯著高于PBS組(55%)。與PBS組相比,CT+ESA組肝和腦組織內(nèi)速殖子數(shù)分別減少了80.19%(P0.001)和78.24%(P0.005)。 結(jié)論CT具有顯著的佐劑效應(yīng),CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠可誘導(dǎo)黏膜及系統(tǒng)免疫應(yīng)答并有效抵抗弓形蟲速殖子攻擊,對小鼠弓形蟲感染具有保護作用。
[Abstract]:Objective To observe the effects of cholera toxin ( CT ) combined with Toxoplasma gondii ( ESA ) on mucosal adjuvant and mucosal immune responses induced by intranasal immunization in mice . Methods 60 BALB / c mice were divided into 5 groups randomly divided into 5 groups , 12 in each group , 0 . 5 , 1.0 , 1.5 or 2.0 渭g CT combined with ESA 20 渭g . After the last immunization for 30 days , the health status and survival rate of mice were observed . In the second part , the effects of CT combined with ESA on mucosal immunity and systemic immune responses were observed . BALB / c mice were randomly divided into 3 groups ( 20 渭l , ESA 20 渭g or CT 1.0 渭g + ESA 20 渭g / L ) for 2 weeks . In the third part , 60 BALB / c mice with 6 - week - old BALB / c mice were randomly divided into three groups : 20 渭l PBS , 20 渭g or CT 1.0 渭g + ESA20 渭g / L . All the mice were sacrificed for 2 weeks . After the last immunization , all the mice were sacrificed and killed with 4 脳 104 Toxoplasma gondii tachyzoites / rats . Results The high level immune responses of MLN , PP and splenic lymphocytes were induced by CT combined ESA intranasal immunization , and there was no significant difference ( P0.05 ) between the higher dose group ( 1.0 渭g , 1.5 渭g and 2.0 渭g ) ( P0.05 ) .



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本文編號：1379444