本文關(guān)鍵詞：法尼醇X受體上調(diào)PC表達(dá)及其機(jī)制初探　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2010年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 研究背景: PC是肝臟分泌的糖蛋白,在內(nèi)皮細(xì)胞表面水解活化為活化蛋白C(activated protein C,APC)后,發(fā)揮抗凝、抗炎的作用。重組人活化蛋白C(recombinated human protein C, rhAPC)在臨床治療中顯著改善了膿毒血癥患者的預(yù)后。法尼醇X受體(Farnesoid X Receptor, FXR)作為一種核受體,調(diào)節(jié)維持肝臟的各種代謝,發(fā)揮保肝的作用。FXR基因敲除小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的肝炎,天然的腫瘤易患性。最近的研究不斷提示FXR具有顯著的抗炎功能,是潛在的抗炎靶標(biāo)分子。生理濃度下的多種初級(jí)和次級(jí)膽汁酸,以及一些多不飽和脂肪酸可激活FXR,其中以鵝脫氧膽汁酸(chenodexycholic acid, CDCA)為FXR的最適天然配體。由于FXR和PC均表達(dá)于肝臟,且二者均與炎癥密切相關(guān),那么PC是否是FXR的一個(gè)新靶基因,其表達(dá)是否可受到FXR的調(diào)節(jié)?弄清該問(wèn)題,將為進(jìn)一步闡明二者在炎癥發(fā)生發(fā)展中的作用,尋找防治炎癥的新靶點(diǎn)提供科學(xué)依據(jù)。研究目的:探討FXR對(duì)PC表達(dá)的影響及可能機(jī)制。 研究方法: 選取肝癌細(xì)胞HepG2為細(xì)胞模型,經(jīng)FXR激動(dòng)劑CDCA處理24h后,RT-PCR、Real-time PCR檢測(cè)PC mRNA的變化;ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PC蛋白表達(dá)的差異。 在線(xiàn)預(yù)測(cè)PC基因5'側(cè)翼啟動(dòng)子區(qū)域(-3000bp～+150bp)可能存在的FXR結(jié)合位點(diǎn),據(jù)此構(gòu)建(包括或不包括可能位點(diǎn))含有PC基因上游啟動(dòng)子不同長(zhǎng)度片段的報(bào)告基因重組質(zhì)粒。在胚肝L02細(xì)胞中,通過(guò)瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染的方法,運(yùn)用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)FXR活化對(duì)PC啟動(dòng)子活性的影響。 用RT-PCR、Real-time PCR及ELISA方法檢測(cè)PPARγ活化對(duì)PC表達(dá)的影響。進(jìn)而確認(rèn)是否存在“FXR→PPARγ→PC”這樣一條調(diào)控通路。 研究結(jié)果: (1)在HepG2細(xì)胞中,CDCA活化FXR,上調(diào)PC mRNA和蛋白表達(dá); (2)在L02細(xì)胞中,FXR的活化可增強(qiáng)PC啟動(dòng)子的活性,但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與FXR結(jié)合的位點(diǎn)。 (3)在HepG2細(xì)胞中,PPARγ的活化可上調(diào)PC的表達(dá)。 (4) GW9662拮抗PPARγ,可部分抑制FXR活化的PC表達(dá)增高,說(shuō)明存在“活化FXR→PPARγ→PC”這樣的間接調(diào)控通路。而關(guān)于PPARγ誘導(dǎo)PC表達(dá)及FXR增強(qiáng)PC啟動(dòng)子活性的分子機(jī)制,還有待進(jìn)一步的研究。 結(jié)論: 在HepG2細(xì)胞中,FXR及PPARγ的活化可上調(diào)PC的表達(dá)。本研究為深入研究FXR在炎癥以及AS等相關(guān)疾病中的作用及炎癥治療靶標(biāo)的研究提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R341

【參考文獻(xiàn)】

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1 彭家和;劉紅;張遷;申麗麗;張艷;董金瑜;蘇暢;江渝;;小鼠MCP-1基因啟動(dòng)子的克隆及核受體FXR下調(diào)其活性初步分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年01期

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本文編號(hào)：1350795