本文關(guān)鍵詞：弓形蟲基因疫苗SAG1-MIC4免疫小鼠的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《山東大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 弓形蟲是一種全球分布且廣泛寄生于人體及動(dòng)物有核細(xì)胞的專性寄生原蟲,能引起人獸共患的弓形蟲病。該病的人群感染極為普遍,多數(shù)屬于隱性感染。孕婦孕期首次感染弓形蟲后可導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形。弓形蟲病也是一種常見的機(jī)會(huì)性寄生蟲病,是導(dǎo)致免疫功能嚴(yán)重低下的患者如患有惡性腫瘤、施行器官移植、長(zhǎng)期接受放射治療、應(yīng)用免疫抑制劑以及先天性、后天性免疫缺陷者如艾滋病患者死亡的一種重要原因。此外,由弓形蟲引起的禽畜類疾病也給畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。迄今尚無(wú)治療弓形蟲病的特效藥物,因此研制安全有效的疫苗極為迫切。 弓形蟲生活史較復(fù)雜,抗原成分具有發(fā)育階段的特異性或差異性。因此成功的弓形蟲疫苗應(yīng)針對(duì)多個(gè)特異性抗原,所產(chǎn)生的保護(hù)性免疫力需要針對(duì)生活史中一個(gè)以上的感染階段。SAG1為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一,具有高度的免疫原性和免疫保護(hù)性,是弓形蟲疫苗開發(fā)的主要抗原。MIC4是弓形蟲微線體分泌的一種蛋白,主要協(xié)助蟲體入侵宿主細(xì)胞,在弓形蟲生活史的所有感染階段中均有表達(dá),具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和MIC4在蟲體入侵宿主的過程中相互促進(jìn),其相應(yīng)的抗體可有效拮抗弓形蟲感染。 同時(shí),為攻克核酸疫苗免疫效力低下的難題,我們選用霍亂毒素(Choleratoxin)A2/B亞單位(CTA2/B)的真核表達(dá)質(zhì)粒作為基因佐劑,以增強(qiáng)弓形蟲復(fù)合抗原基因SAG1-MIC4的免疫效果。霍亂毒素是目前常用的免疫佐劑,具有較強(qiáng)的粘膜免疫原性和粘膜免疫佐劑效應(yīng),能有效增強(qiáng)抗原蛋白的免疫原性,同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體的免疫作用。CTA2/B是一種有效誘導(dǎo)Th2型(IgG,sIgA)細(xì)胞反應(yīng)為主的免疫佐劑,是粘膜免疫的有效激活劑,故可增強(qiáng)DNA疫苗粘膜免疫的免疫效果。 本研究首先利用PCR技術(shù)從弓形蟲基因組中獲取基因SAG1和MIC4以構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-SAG1,pcDNA3.1-MIC4及復(fù)合質(zhì)粒pcDNA3.1-SAG1-MIC4。通過轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,利用RT-PCR檢測(cè)其正常轉(zhuǎn)錄及表達(dá)情況。最后利用構(gòu)建好的質(zhì)粒及佐劑pcDNA3.1-CTA2/B通過粘膜免疫的方式免疫小鼠,檢測(cè)這些疫苗引起的體液免疫和細(xì)胞免疫指標(biāo)。之后腹腔注射弓形蟲速殖子以觀察并研究其免疫保護(hù)性。結(jié)果正確的構(gòu)建了三種表達(dá)載體,經(jīng)RT-PCR證明各質(zhì)粒在Hela細(xì)胞中得到正確的轉(zhuǎn)錄。檢測(cè)的免疫指標(biāo)證明這些質(zhì)粒均能引起很好的免疫應(yīng)答反應(yīng)。弓形蟲RH株攻擊試驗(yàn)表明各疫苗對(duì)小鼠均有一定免疫保護(hù)性,且復(fù)合基因疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于單基因疫苗,并且基因佐劑CTA2/B可以對(duì)該復(fù)合基因疫苗起到很好的免疫增強(qiáng)作用。上述結(jié)果為深入研究基因疫苗的實(shí)際應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1350332