本文關(guān)鍵詞：RHAG基因克隆與多態(tài)性研究　出處：《華東師范大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： RHD RHAG 多態(tài)性 pcDNA3.1~+載體

【摘要】： RH血型系統(tǒng)是人類30個血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的,至少由45種獨立抗原組成,其中D抗原免疫性最強。Rh抗原的強烈免疫原性使這一系統(tǒng)在輸血治療中有重要的臨床價值;Rh抗原涉及輸血中的溶血反應(yīng)、新生兒溶血癥(HDN)和自身免疫溶血貧血癥。RHAG血型系統(tǒng)是人類第30個血型系統(tǒng),目前由3個抗原組成,由RHAG基因控制。 雖然RHAG與RHD屬于不同的血型系統(tǒng),但兩者密切相關(guān)。RH血型系統(tǒng)的主要抗原D同時受到RHAG基因的調(diào)控,RHAG基因的失活可以導(dǎo)致RH系統(tǒng)所有抗原的缺失。這兩個基因具有高度同源性,同屬與人類RH基因家族,都是由10個外顯子組成的大約75Kb的DNA,其中外顯子2-9區(qū)域相似程度很高,說明RHAG和RHD基因可能是由同一個祖先經(jīng)過染色體插入后在兩個分隔的位點上形成的。RHD位于1號染色體的1p36.13～p34.3,編碼RhD蛋白。RHAG基因位于6號染色體的6p11～p21.1,編碼Rh相關(guān)糖蛋白RhAG。 RhAG糖蛋白參與紅細胞膜表面Rh復(fù)合物的形成。研究表明,Rh復(fù)合物的主體可能是一個由Rh亞基和RhAG亞基組成的三聚體結(jié)構(gòu),連接有CD47、LW和GPB等Rh相關(guān)抗原,并與帶3蛋白相連,在紅細胞膜上形成Rh巨復(fù)合體。 當RHD基因缺失或某個位點發(fā)生突變時,編碼的相應(yīng)氨基酸發(fā)生變化,導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)和功能都發(fā)生變化,最終會引起Rh抗原的變化。RhAG蛋白不直接表達Rh抗原性,但會影響RhD和RhCE蛋白的表達。RHAG基因突變會產(chǎn)生十分罕見的Rh缺失綜合癥Rh_(null)和Rh_(mod),這種表型的紅細胞上缺乏所有Rh相關(guān)抗原。 目前研究表明,引起Rh缺失表型的分子機制有兩種,一種是由于RHD和RHCE基因位座出現(xiàn)沉默基因純合子,另一種是RH基因正常,但RHAG基因是一種無活性的突變。但也有些Rh_(null)是RHAG單一一個或兩個錯義突變形成的,導(dǎo)致某個氨基酸發(fā)生置換,這些微小的變化使RHAG基因失活。對Rh_(null)表型紅細胞的結(jié)構(gòu)和功能變化,目前已有詳盡研究。Rh缺失表型對紅細胞抗原的影響已超過Rh血型系統(tǒng),在Rh_(null)和Rh_(mod)紅細胞上,LW,GPB和CD47等抗原也缺少或至少減弱表達。通過RT-PCR和測序,發(fā)現(xiàn)Rh_(null)紅細胞具有正常RHD和RHCEcDNA,說明Rh_(null)并非是由RHD或RHCE基因發(fā)生突變所引起的。而對RHAG的RT-PCR分析顯示,Rh_(null)紅細胞和對照紅細胞有明顯不同。在這些罕見的Rh_(null)個體中,RHAG基因發(fā)生突變,阻止Rh糖蛋白和紅細胞膜連接,同時阻止D、C/c、E/e多肽與紅細胞膜的連接。由此可見,RhAG對Rh蛋白在紅細胞膜上的正確裝配非常重要。 RHD基因的多態(tài)性較為復(fù)雜,在不同人群中也存在差異,RHAG基因相對RHD保守,目前發(fā)現(xiàn)RHAG等位基因只有13個,而且都是位于罕見的Rh_(null)和Rh_(mod)個體中。中國人群中RHD陰性可能由多種基因背景引發(fā),其中RHAG基因起了什么作用,仍然未知。至于正常RhD表型個體,特別是中國人群中RHAG基因的表達情況,尚未得到充分研究。因此克隆中國漢族RHD基因正常人群的RHAG基因,測定其序列,并進行多態(tài)性分析,有較為重要的研究價值。此外,中國人群的RhD變異型中存在RhD表型與RHD基因不符的情況,這需要對標本的RHAG基因進行檢測。 RHD在K562中的表達實驗國內(nèi)外均有成功報道,但RHD和RHAG雙基因的克隆及共轉(zhuǎn)染實驗仍然具有一定難度,而RHAG突變個體的RHD和RHAG雙基因轉(zhuǎn)染實驗未見報道。本實驗選擇了正常RhD表型個體和RhD變異型個體作為實驗標本,成功建立了RHAG基因的全長轉(zhuǎn)錄本和啟動子區(qū)域擴增方法,并構(gòu)建pcDNA3.1~+-RhAG和pcDNA3.1~+-RhD表達載體,同時建立了針對RhD和RhAG蛋白的檢測方法,最后得到以下結(jié)論: 1.中國人群正常RhD表型個體中,RHAG基因轉(zhuǎn)錄本區(qū)域不存在多態(tài)性現(xiàn)象; 2.中國人群正常RhD表型個體和RhD變異型個體的啟動子區(qū)域都存在多態(tài)性; 3.首次在中國人群RhD變異型標本中發(fā)現(xiàn)一例新的RHAG等位基因,該 等位基因是RHAG外顯子第582位C＞T雜合突變。 目前關(guān)于黃種人中RHAG基因轉(zhuǎn)錄本和啟動子區(qū)域的研究尚未見報導(dǎo),本實驗首次對中國人群中正常RhD表型個體和RhD變異型個體的RHAG轉(zhuǎn)錄本和啟動子區(qū)域進行探索,研究。并發(fā)現(xiàn)RhD變異型標本的RHAG基因基本正常,RHAG對RhD蛋白表達的影響很小。針對對RHAG突變個體,我們?nèi)匀恍枰M一補開展RhD和RhAG的共表達研究。
[Abstract]:The RH blood group system is the most complex of the 30 human blood group systems, consisting of at least 45 independent antigens, of which the D antigen has the strongest immunity. The strong immunogenicity of Rh antigen makes the system valuable in transfusion therapy. Rh antigen is related to hemolytic reaction in transfusion, hemolytic disease of newborn (HDN) and autoimmune hemolytic anemia. The RHAG blood group system is the thirtieth human blood type system, which is currently composed of 3 antigens and is controlled by the RHAG gene.
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R457;R346

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉鐘瀚;李健;楊群身;;血清學(xué)鑒定罕見Rhnull血型1例[J];中國輸血雜志;2007年01期

2 嚴力行,許先國,朱發(fā)明,何吉;RHD基因的克隆及其在K562細胞中的表達[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2005年03期

，

本文編號：1346665