本文關(guān)鍵詞：可溶性HLA-G二聚體抑制同種T細胞應(yīng)答的研究　出處：《華中科技大學(xué)》2008年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 可溶性HLA-G二聚體 同種T細胞應(yīng)答 ILT2

【摘要】： MHC型別不同的供/受者間進行移植后會發(fā)生強烈的排斥反應(yīng),其機制主要是同種反應(yīng)性T細胞(簡稱同種T細胞)識別同種異體組織抗原(簡稱同種抗原)并產(chǎn)生應(yīng)答。大量免疫抑制劑的應(yīng)用過度的抑制了機體的免疫系統(tǒng),使受者處于罹患嚴(yán)重感染的風(fēng)險之中,因而誘導(dǎo)同種異體耐受成為亟待解決的問題。HLA-G是一種非經(jīng)典的HLAⅠ類分子,其限制性的組織分布、有限的基因多態(tài)性提示其為一種誘導(dǎo)免疫耐受的分子。體外研究資料顯示HLA-G通過與抑制性受體的結(jié)合誘導(dǎo)T、B、NK、DC、巨噬細胞等免疫細胞的免疫耐受,臨床病例研究也顯示HLA-G陽性的受者與陰性受者相比,急性排斥期縮短,慢性排斥發(fā)生率降低。最新研究表明HLA-G二聚體形式對于HLA-G與抑制性受體的結(jié)合以及生物學(xué)功能的發(fā)揮都起著至關(guān)重要的作用。本研究采用基因工程技術(shù)構(gòu)建并制備了可溶性HLA-G二聚體,并利用混合淋巴細胞培養(yǎng)模型研究了該分子抑制同種T細胞應(yīng)答的作用。論文分為2個部分,主要內(nèi)容與結(jié)果如下: 一可溶性HLA-G二聚體的制備 本研究利用基因工程技術(shù)將編碼HLA-G重鏈胞外段(α1-α3區(qū))的基因與編碼人IgG-Fc段的基因融合插入到真核表達載體pcDNA3.1+中形成pcDNA3.1+[sHLA-G/IgG]質(zhì)粒。通過電穿孔技術(shù)將質(zhì)粒導(dǎo)入HLAⅠ類分子和IgG重鏈缺陷的721.221細胞中表達,篩選出高效表達的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子(dimer-721.221),經(jīng)特異性ELISA和western blotting鑒定表達的HLA-G/IgG融合蛋白具有正確的分子量和空間構(gòu)象,并通過IgG-Fc段形成了二聚體,將該融合蛋白命名為可溶性HLA-G二聚體。 二可溶性HLA-G二聚體抑制同種T細胞應(yīng)答的研究 本研究利用滅活的T1與HLA陰性的健康人外周血淋巴細胞的混合淋巴細胞培養(yǎng)模型模擬同種反應(yīng),研究了HLA-G二聚體抑制同種T細胞應(yīng)答的作用。結(jié)果顯示,HLA-G二聚體在納摩爾水平抑制同種T細胞應(yīng)答:抑制同種反應(yīng)性CD8+、CD4+T細胞的活化和增殖,抑制同種CTL細胞的產(chǎn)生,并且這種抑制作用比HLA-G單體要強。此外,HLA-G二聚體還可上調(diào)同種反應(yīng)性CD8+T細胞表面ILT2的表達,而這種作用又可進一步促進HLA-G二聚體的抑制功能。鑒于HLA-G二聚體與受體的高親和力以及抑制同種T細胞應(yīng)答的高效率,該分子可望應(yīng)用于HLA-G/受體的結(jié)合研究以及誘導(dǎo)同種移植耐受。 本研究的創(chuàng)新點和意義: 1.本研究首次利用基因工程技術(shù)構(gòu)建、表達了可溶性HLA-G二聚體,證實了該分子在納摩爾水平抑制同種反應(yīng)性T細胞的活化和增殖、抑制同種CTL的產(chǎn)生; 2.本研究首次將HLA-G二聚體與HLA-G單體在抑制同種反應(yīng)性T細胞增殖方面的功能進行了比較,并證實HLA-G二聚體比單體更高效; 3.本研究首次報導(dǎo)了HLA-G在蛋白水平上調(diào)同種反應(yīng)性CD8+T細胞表面ILT2的表達,這種上調(diào)作用又可進一步促進HLA-G二聚體的功能; 本研究制備的HLA-G二聚體將有利于HLA-G/受體的結(jié)合研究,并應(yīng)用于誘導(dǎo)同種移植耐受。
[Abstract]:There is a strong rejection after transplantation between different donor / recipient of MHC type. The mechanism is mainly that allogeneic T cells (allogeneic T cells) recognize alloantigens and respond. The application of a large number of immunosuppressive agents has inhibited the body's immune system and caused the risk of serious infection. Therefore, induction of allogeneic tolerance has become an urgent problem. HLA-G is a non classical HLA class I molecule, whose restrictive tissue distribution and limited gene polymorphism suggest that it is a molecule that induces immune tolerance. Research data show HLA-G in vitro immune tolerance by combining with inhibitory receptors induced by T, B, NK, DC, macrophages and other immune cells, clinical case studies also show that HLA-G compared to subjects with positive negative patients, acute rejection period shorten, reduce the incidence of chronic rejection. Recent studies have shown that the form of HLA-G two polymer plays a vital role in the combination of HLA-G with inhibitory receptors and the play of biological functions. In this study, we constructed and prepared soluble HLA-G two mer by genetic engineering technology, and studied the inhibitory effect of this molecule on homologous T cell response by mixed lymphocyte culture model. The paper is divided into 2 parts. The main contents and results are as follows:
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 房崇蕓,吳雄文,龔非力;可溶性人類白細胞抗原-G1 cDNA的克隆及序列分析[J];免疫學(xué)雜志;2001年02期

2 陳浩,翁秀芳,吳雄文,梁智輝,韓軍艷,黃亞非,龔非力;人β_2m基因的克隆及表達[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年01期

3 楊敬寧,吳雄文,梁智輝,陸盛軍,尹姝晗,蔡蕾,韓軍艷,黃亞非,龔非力;可溶性HLA-G1重鏈分子的構(gòu)建、表達及純化[J];中國免疫學(xué)雜志;2005年04期

，

本文編號：1346215