本文關(guān)鍵詞：RNA干擾GSK-3β基因表達(dá)對(duì)Nogo-A抑制PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的影響　出處：《華中科技大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的研究GSK-3β基因沉默對(duì)Nogo-A抑制PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的影響。 方法構(gòu)建靶向GSK-3β的短發(fā)夾樣RNA(shRNA)真核表達(dá)載體,利用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒、空白質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒到PC12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后應(yīng)用熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況并利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)GSK-3βRNA的抑制效應(yīng)。加用小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)PC12分化,促進(jìn)其軸突生長(zhǎng),72h后調(diào)整細(xì)胞密度并加用Nogo-A蛋白,48h后應(yīng)用熒光倒置顯微鏡觀察在Nogo-A蛋白存在的情況下,各組PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的不同變化,使用Image-Pro Plus6.0軟件對(duì)各組細(xì)胞的軸突進(jìn)行測(cè)量并利用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果(1)成功構(gòu)建出針對(duì)GSK-3β的shRNA真核表達(dá)載體pGenesil1.1- GSK-3β;(2)在藍(lán)色激發(fā)光下,成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比,可發(fā)出綠色熒光。實(shí)驗(yàn)組、空白組和陰性對(duì)照組的轉(zhuǎn)染效率分別為43%、80%、76%(3)干擾質(zhì)�？梢杂行У匾种艷SK-3β的基因表達(dá);(4)小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)各組細(xì)胞72h及Nogo-A蛋白作用48h后,空白組和陰性對(duì)照組細(xì)胞軸突長(zhǎng)度無明顯差別(P0.05);實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞軸突較空白組和陰性對(duì)照組增長(zhǎng)(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論GSK-3β參與Nogo-A對(duì)PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的抑制作用。
[Abstract]:Objective to study the effect of GSK-3 beta gene silencing on the inhibitory effect of Nogo-A on the growth of PC12 cells.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：1344156