發(fā)布時間：2017-12-28 02:05

  本文關(guān)鍵詞：血管緊張素Ⅱ?qū)ERG通道蛋白表達(dá)的影響　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system, RAS)是由腎素、血管緊張素以及其受體構(gòu)成的重要體液系統(tǒng),在調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的正常生理功能與高血壓、心肌肥大、充血性心力衰竭等諸多心血管的病理過程中具有重要作用。RAS不僅存在于體液系統(tǒng),而且在包括心臟、血管在內(nèi)的許多組織中也有RAS,在局部調(diào)節(jié)生理病理過程。血管緊張素II(Ang II)是該系統(tǒng)發(fā)揮作用的主要體液因子,其受體有1型(AT1)和2型(AT2)兩種。近幾年大規(guī)模的臨床試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),通過血管緊張轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin-converting enzyme inhibitors,ACEI)抑制Ang II的合成或AT1受體阻斷劑可能因減少致命性心律失常的發(fā)生而明顯降低病人死亡率。實(shí)驗(yàn)表明,抑制RAS可有效治療缺血再灌誘發(fā)的心律失常。ACE抑制劑和AT1受體阻斷劑成為目前臨床高血壓、心衰病人治療的重要藥物。然而,這些藥物潛在抗心律失常的機(jī)制尚不清楚。 心肌肥厚、心衰時最突出的表現(xiàn)是心肌細(xì)胞復(fù)極化過程變慢,而導(dǎo)致動作電位的延長,為細(xì)胞產(chǎn)生后除極、尖端扭轉(zhuǎn)性室速等心律失常創(chuàng)造了前提條件。實(shí)驗(yàn)表明,過表達(dá)人Ang II基因的大鼠經(jīng)常因嚴(yán)重室性心動過速而猝死;選擇性心肌組織過表達(dá)Ang II基因的小鼠在不增加循環(huán)Ang II水平的情況下出現(xiàn)明顯復(fù)極化延遲,伴高發(fā)的室性心律失常;與上述結(jié)果相似,Rivard等新近報(bào)道,心臟特異性過表達(dá)人類AT1受體基因小鼠瞬時外向K+電流(Ito )、超快激活的延遲整流電流(IKur)及內(nèi)向整流電流(IK1)均下調(diào)造成復(fù)極延遲,動作電位延長,伴自發(fā)室性心律失常。特別值得注意的是,年幼的轉(zhuǎn)基因動物即存在復(fù)極化延遲及高發(fā)的心律失常,而此時并不存在組織肥厚性重構(gòu),表明電生理改變并非繼發(fā)于肥厚性重構(gòu),而是刺激AT1受體直接引起離子通道的改變。有實(shí)驗(yàn)表明,在分離的大鼠和犬的心室肌細(xì)胞及表達(dá)編碼Ito通道基因Kv4.3的哺乳細(xì)胞上,Ang II均可減小Ito密度。上述結(jié)果提示除通過肥厚型組織重構(gòu)引發(fā)心臟電生理改變外,Ang II直接對離子通道的調(diào)節(jié)作用可能是病理性電重構(gòu)的重要因素。然而,心室復(fù)極化K +電流存在明顯的種屬差別,Ito是大鼠小鼠的主要復(fù)極化電流,而大動物、人的復(fù)極化電流主要是IKr和IKs。目前認(rèn)為,人心肌中IKr由human ether-a-go-go-related gene(HERG)編碼。迄今為止,有關(guān)Ang II對復(fù)極起關(guān)鍵作用的IKr的調(diào)節(jié)作用了解極少。在前期的實(shí)驗(yàn)里我們首次觀察了Ang II對豚鼠心室細(xì)胞IKr和表達(dá)HERG電流的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ang II通過激動AT1受體抑制IKr/HERG電流延緩心室細(xì)胞的復(fù)極過程,此過程主要由細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶C(PKC)信號通路中介。然而Ang II對IKr調(diào)控的分子機(jī)制尚不清楚。 因此本研究利用分子生物學(xué)的方法,在豚鼠心室肌細(xì)胞上觀察AT1受體與HERG通道的分布及其可能的關(guān)系,并在豚鼠心室肌細(xì)胞和異源表達(dá)系統(tǒng)上觀察了Ang II對HERG通道表達(dá)的影響,為Ang II下調(diào)HERG電流的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 一健康成年豚鼠左室游離壁HERG通道及AT1受體蛋白表達(dá)及相互關(guān)系 目的:觀察健康成年豚鼠左心室跨壁心肌層HERG通道及AT1受體蛋白分布及兩者之間的相互關(guān)系。 方法:在急性分離的豚鼠心室肌細(xì)胞下分別取內(nèi)、中、外三層心肌細(xì)胞膜,提取蛋白,用蛋白質(zhì)電泳的方法測定HERG通道及AT1受體蛋白在各層的分布。用免疫共沉淀及免疫熒光方法確定兩者分布相關(guān)性。 結(jié)果:(1)HERG通道蛋白在豚鼠左室游離壁分布不一致。內(nèi)膜下心肌最少,中層和外膜下心肌層沒有明顯差別。(2)AT1受體蛋白在豚鼠左室游離壁分布不一致。中膜最少,內(nèi)膜外膜沒有明顯差別。(3)免疫共沉淀表明,AT1受體蛋白與HERG蛋白結(jié)構(gòu)存在交聯(lián)。(4)免疫熒光表明,AT1受體蛋白與HERG蛋白在豚鼠心肌細(xì)胞上分布一致。結(jié)論:HERG蛋白與AT1受體蛋白在正常豚鼠左室游離壁分布均存在跨壁異質(zhì)性;HERG與AT1受體在細(xì)胞膜上分布一致,且二者以復(fù)合物形式結(jié)合。 二血管緊張素Ⅱ?qū)Τ墒霩ERG通道蛋白表達(dá)的影響 目的:在共轉(zhuǎn)染HERG和AT1受體的HEK-293細(xì)胞及急性分離的豚鼠左室游離壁細(xì)胞,觀察Ang II長時間與細(xì)胞孵育后對HERG通道成熟蛋白表達(dá)的影響。 方法:用Lipofectin 2000轉(zhuǎn)染試劑將AT1基因轉(zhuǎn)染到穩(wěn)態(tài)轉(zhuǎn)染的HERG-HEK293細(xì)胞,用蛋白質(zhì)電泳確定AT1受體成功轉(zhuǎn)染后,觀察不同濃度Ang II在不同時間對HERG通道成熟蛋白表達(dá)的影響;急性分離的豚鼠左室游離壁細(xì)胞,與100 nM Ang II孵育6小時,觀察HERG通道成熟蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果:(1)孵育Ang II 10 nM、100 nM、1μM后24小時可抑制HERG通道蛋白表達(dá),孵育10 min沒有明顯影響HERG通道蛋白的表達(dá)。(2)孵育Ang II 100 nM 2 h、4 h、8 h、12 h、24 h,與對照相比在12 h后HERG通道成熟蛋白表達(dá)開始下降。(3)對于急性分離豚鼠心肌左室游離壁細(xì)胞,Ang II孵育6小時對HERG通道蛋白的表達(dá)沒有明顯影響。 結(jié)論:在異源表達(dá)系統(tǒng),Ang II作用于AT1受體,可減少HERG通道成熟蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:The renin-angiotensin system (renin-angiotensin system RAS) is an important humoral system of renin, angiotensin and its receptor which plays an important role in the pathological process of regulation of the cardiovascular system and the normal physiological function of hypertension, cardiac hypertrophy, congestive heart failure and other cardiovascular. RAS not only exists in the humoral system, but also in many tissues, including the heart and blood vessels, and RAS in the local regulation of the physiological and pathological processes. Angiotensin II (Ang II) is the main body fluid factor of the system, and its receptor has two types (AT1) and type 2 (AT2). In recent years, large-scale clinical trials found that the inhibition of Ang II synthesis or AT1 receptor blockers by angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEI) may reduce the mortality of patients due to the reduction of fatal arrhythmia. The experiment showed that inhibition of RAS could effectively treat the arrhythmia induced by ischemia reperfusion. ACE inhibitors and AT1 receptor blockers have become an important drug in the treatment of patients with hypertension and heart failure. However, the mechanism of the potential antiarrhythmic effects of these drugs is not clear.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張繁之;張存泰;王琳;;血管緊張素Ⅱ與心律失常[J];中國心臟起搏與心電生理雜志;2005年06期

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本文編號：1344106