本文關(guān)鍵詞：培養(yǎng)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程角膜上皮層的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《暨南大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的：1、比較不同消化分離方法提取人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(HAMSCs)的分離效果,以選擇一種更有效的分離方法。2、探索水溶性量子點(diǎn)(QDs)活體示蹤標(biāo)記HAMSCs的最適條件,以便能較好地應(yīng)用于后期活體示蹤標(biāo)記HAMSCs體內(nèi)誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)。3、探討HAMSCs構(gòu)建組織工程角膜上皮層的可能性。 方法：1、將新鮮羊膜組織分成4片6cm×6cm大小的組織塊,采用4種不同方法進(jìn)行消化分離：第一組：先刮除+膠原酶Ⅱ組；第二組：先刮除+膠原酶Ⅳ組；第三組：先剪碎+膠原酶Ⅱ組；第四組：先剪碎+膠原酶Ⅳ組。對(duì)這4組原代培養(yǎng)HAMSCs進(jìn)行存活數(shù),形態(tài)學(xué)觀察比較,第3代HAMSCs抗原檢測(cè)及成脂成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)。2、將10nmol/L濃度的水溶性CdSe/ZnS QDs與第3代HAMSCs分別標(biāo)記20min、30min、40min、60min,激光共聚焦掃描顯微鏡觀察哪個(gè)標(biāo)記時(shí)間HAMSCs獲取的QDs量最多并且比較常規(guī)培養(yǎng)14d后各標(biāo)記時(shí)間的QDs存留于HAMSCs體內(nèi)的情況。3、將第3代HAMSCs種植于去角膜上皮細(xì)胞的兔角膜基質(zhì)片上進(jìn)行培養(yǎng),待HAMSCs達(dá)到80%-90%融合時(shí),再移至插入式培養(yǎng)皿中進(jìn)行氣液界面誘導(dǎo)分化培養(yǎng)14d,最后將兔角膜基質(zhì)片進(jìn)行固定、切片、HE染色和CK3+12免疫組化檢測(cè)。 結(jié)果：1、第一組和第二組的HAMSCs存活數(shù)高于第三組和第四組(p0.05)。第一組和第二組的HAMSCs成份較第三組和第四組純凈,后兩組夾雜著一些團(tuán)狀的人羊膜上皮細(xì)胞(HAECs)。抗原結(jié)果顯示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表達(dá)陽(yáng)性,CD31、CD34、CD45、HLA-DR表達(dá)陰性,Vimentin、SSEA-3、SSEA-4、OCT-4、telomerase結(jié)果陽(yáng)性。成脂成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)成功。2、lOnmol/L QDs標(biāo)記30min和40min后,HAMSCs獲取的QDs和常規(guī)培養(yǎng)14d后存留于HAMSCs體內(nèi)的QDs都是最多的。3、HAMSCs在去角膜上皮細(xì)胞的兔角膜基質(zhì)片上氣液界面共培養(yǎng)14d后可形成3-5層的復(fù)層細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組CK3+12免疫組化檢測(cè)呈陽(yáng)性。 結(jié)論：1、通過先將人羊膜用胰蛋白酶+EDTA消化液消化后,再將HAECs刮除干凈,然后剪碎再用膠原酶消化的改進(jìn)方法是對(duì)HAMSCs保護(hù)較好,較易提取,獲取細(xì)胞量和純度均較傳統(tǒng)方法高。膠原酶Ⅱ和膠原酶Ⅳ兩種消化酶對(duì)HAMSCs的提取影響不大。2、10nmol/L濃度的QDs和30min或40min的標(biāo)記時(shí)間是用于HAMSCs活細(xì)胞成像和動(dòng)態(tài)研究及體內(nèi)示蹤的一個(gè)較好的標(biāo)記條件。3、HAMSCs可能成為眼表疾病患者重構(gòu)角膜上皮層和恢復(fù)視覺功能的一種更方便、更理想的種子細(xì)胞。
[Abstract]:Objective: 1. The isolation of human amniotic mesenchymal stem cells (HAMSCs) was extracted by different digestion methods, so as to choose a more effective separation method. 2, explore the best conditions of labeling HAMSCs with living water tracer quantum dots (QDs) in vivo, so that it can be well applied to late vivo labeling of HAMSCs induced differentiation in vivo. 3. The possibility of constructing the corneal epithelial layer of tissue engineering by HAMSCs was discussed.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1343612