本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌的分子分型及其Panton-Valentine殺白細(xì)胞素基因的克隆與表達(dá)　出處：《中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 血流感染 金黃色葡萄球菌 分子分型 Panton-Valentine殺白細(xì)胞素 克隆 表達(dá)

【摘要】： 目的：了解我院致血流感染金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)特征；篩查血流感染金黃色葡萄球菌Panton—Valentine殺白細(xì)胞素基因(pvl基因)攜帶情況；構(gòu)建lukS-PV和lukF-PV基因表達(dá)載體,并在大腸桿菌中表達(dá)相應(yīng)蛋白。方法：收集2006年1月至2008年12月期間我院臨床分離的致血流感染金黃色葡萄球菌菌株(共47株),標(biāo)本來源均為患者靜脈血。瓊脂平板稀釋法檢測(cè)所有菌株對(duì)多種抗菌藥物的耐藥性,PCR方法檢測(cè)pvl基因,應(yīng)用DiversiLabTM Rep-PCR菌株分型系統(tǒng)進(jìn)行菌株的同源性分析；對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)進(jìn)行葡萄球菌染色體mec(SCCmec)分型、脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulse-field Electrophoresis, PFGE)分型以及ST239型別的快速篩查；綜合分型結(jié)果和藥敏試驗(yàn)結(jié)果,挑選部分代表菌株進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型(Multilocus Sequence Typing, MLST)。通過分子生物學(xué)技術(shù),克隆并表達(dá)lukS-PV和lukF-PV基因。 結(jié)果：47株致血流感染金黃色葡萄球菌菌株中,pvl因檢出率為4.3%(2／47)。MRSA24株,占51.1%,所有MRSA均為SCCmecⅢ型菌株,其中22株(91.67%)為ST239; DiversiLabTM Rep-PCR菌株分型系統(tǒng)將47株金黃色葡萄球菌分為A～L共12個(gè)型,其中A型為最主要的型,共22株,占46.8%,所有的MRSA均屬于A、B兩型；脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)將MRSA分為A～F共6個(gè)型別,A型有A1～A6六個(gè)亞型,B型有2個(gè)亞型。成功克隆lukS-PV和lukF-PV基因,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒lukF-PV-pET28a(+)知lukS-PV-pET28a(+),在宿主菌BL21中表達(dá)重組蛋白取得初步成功。 結(jié)論：2006年1月至2008年12月我院分離的臨床血流感染金黃色葡萄球菌中甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌絕大部分為多重耐藥克隆MRSA-ST239-SCCmecⅢ型。這些MRSA在分子水平上有較近的親緣關(guān)系,一些病房可能存在暴發(fā)流行。致血流感染金黃色葡萄球菌中的pvl基因檢出率不高,為4.3%：lukS-PV和lukF-PV基因的成功克隆及初步表達(dá)為建立Panton—Valentine殺白細(xì)胞素(PVL)的免疫檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: To investigate the molecular epidemiology of bloodstream infections in our hospital caused by Staphylococcus aureus; Staphylococcus aureus Panton Valentine screening bloodstream infection Leucocidin gene (PVL gene) carrying; construct the expression vector of lukS-PV gene and lukF-PV gene and protein expression in Escherichia coli. Methods: a total of 47 strains of Staphylococcus aureus were isolated from January 2006 to December 2008 in our hospital. Detection of agar dilution method all strains on a variety of antimicrobial agents, PCR method for detection of PVL gene, homology analysis of Rep-PCR strains using DiversiLabTM strain typing system; against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (Methicillin-resistant Staphylococcus, aureus, MRSA) of staphylococcal chromosome mec (SCCmec) typing and pulsed field gel electrophoresis (Pulse-field Electrophoresis, PFGE) classification and rapid screening of type ST239; comprehensive classification results and the results of drug sensitive test, choose some representative strains for multilocus sequence typing (Multilocus Sequence, Typing, MLST). LukS-PV and lukF-PV genes were cloned and expressed by molecular biology techniques.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李光輝,朱德妹,張嬰元,汪復(fù);1995~2001年上海地區(qū)部分醫(yī)院血培養(yǎng)分離菌的分布及耐藥性變遷[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2005年06期

，

本文編號(hào)：1343559