本文關(guān)鍵詞：去分化來源表皮干細(xì)胞的誘導(dǎo)及應(yīng)用研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的:1.通過建立表皮細(xì)胞去分化的三種體外模型,對(duì)比三種去分化來源的表皮干細(xì)胞(dedifferention epidermal stem cells,DESCs)和原始表皮干細(xì)胞(epidermal stem cells,ESCs)的細(xì)胞形態(tài)和免疫表型,從中篩選出高效率的去分化誘導(dǎo)方法;2.將DESCs移植入裸鼠(BALB/c mice)背部創(chuàng)面,觀察其對(duì)創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用。 方法:1.由人新鮮的包皮標(biāo)本中分離獲得ESCs,通過傳代培養(yǎng)獲得成熟的表皮細(xì)胞(epidermal cells,ECs),倒置顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞的形態(tài)、免疫組化檢測(cè)細(xì)胞表型、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及增殖指數(shù)。2.取同一包皮分離的ESCs,隨機(jī)均分為5組,將其中一組ESCs作為原始表皮干細(xì)胞進(jìn)行凍存待檢測(cè),其余4組進(jìn)行培養(yǎng)傳代,獲得成熟的ECs。再分別以熱、雙氧水(H_2O_2)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)處理其中的3組ECs,并在處理后3d、7d、14d將3組去分化細(xì)胞與ESCs和ECs兩對(duì)照組一起進(jìn)行相關(guān)檢測(cè):以倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變;細(xì)胞免疫組織化學(xué)觀察β1整合素、CK10、CK19等表型的變化;隨機(jī)選10個(gè)視野做β1整合素陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3.建立裸鼠背部創(chuàng)面模型,麻醉下在每個(gè)裸鼠背部脊柱兩側(cè)制備2個(gè)直徑為6mm的圓形創(chuàng)面,直至深筋膜,共24個(gè)創(chuàng)面。將24個(gè)創(chuàng)面隨機(jī)分為DESCs、ESCs、ECs、生理鹽水(normal saline,NS)組等4組,每組6個(gè)創(chuàng)面。分別消化離心以DAPI標(biāo)記的DESCs、ESCs、ECs,加入適量NS使細(xì)胞懸液終濃度都為2×10~6個(gè)/ml。用1ml注射器分別將DESCs、ESCs、ECs和NS注射于相應(yīng)創(chuàng)緣皮下及創(chuàng)面基底部,劑量為每個(gè)創(chuàng)面0.2ml。于術(shù)后0d、3d、7d統(tǒng)計(jì)創(chuàng)面面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;在術(shù)后7d進(jìn)行創(chuàng)面取材制片,熒光顯微鏡觀察標(biāo)記DAPI的DESCs、ESCs、ECs在創(chuàng)面的分布情況;創(chuàng)面取材制片行HE染色對(duì)比創(chuàng)面的愈合情況。 結(jié)果:1.新鮮分離的ESCs小圓珠狀,核大,核漿比高,細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后連接成片成鋪路石樣,免疫組化顯示其β1整合素、CK19表達(dá)呈陽性,CK10表達(dá)陰性;ECs則寬大扁平,形態(tài)不規(guī)則,核小,核漿比低,無法形成克隆,其CK10表達(dá)呈陽性,β1整合素、CK19表達(dá)陰性。ESCs處于增殖期(G2/M)的細(xì)胞比例要高于ECs。2.三種DESCs在3d、7d、14d的β1整合素陽性細(xì)胞數(shù)均高于ECs組(p＜0.01);應(yīng)用bFGF處理獲得的DESCs在3d和7d的β1整合素陽性細(xì)胞數(shù)要高于其它兩種處理組(p＜0.01);三種DESCs在14d時(shí)的β1整合素陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差異(p＞0.05),和原始ESCs相比亦無明顯差異(p＞0.05)。3.創(chuàng)面愈合實(shí)驗(yàn)中DESCs組和ESCs組在術(shù)后3d和7d的創(chuàng)面面積均小于ECs組和NS組(p＜0.01),DESCs組和ESCs組在術(shù)后3d和7d的創(chuàng)面面積則無明顯差異(p＞0.05)。熒光顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)術(shù)后7d用DAPI標(biāo)記的DESCs和ESCs在皮膚和皮下組織內(nèi)皆有分布,說明兩種ESCs均參與了創(chuàng)面修復(fù);未發(fā)現(xiàn)DAPI標(biāo)記的ECs參與創(chuàng)面修復(fù)。HE染色切片顯示DESCs組和ESCs組的創(chuàng)面愈合質(zhì)量要高于兩個(gè)對(duì)照組,其皮下的纖維組織較少,并發(fā)現(xiàn)有皮膚附屬腺的再生。 結(jié)論:熱、H_2O_2和bFGF皆可誘導(dǎo)ECs去分化成ESCs,其中bFGF比熱和H_2O_2在處理后3d和7d具有更高的促使ECs去分化效率;DESCs和ESCs都可促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù),兩者之間無明顯差異。
[Abstract]:Objective: three to 1. through the establishment of in vitro differentiation of epidermal cells, comparing the three kinds of dedifferentiation derived epithelial stem cells (dedifferention epidermal stem cells, DESCs) and the original epidermal stem cells (epidermal stem cells, ESCs) cell morphology and immunophenotype, screened from high efficiency to differentiation method; 2. DESCs will be transplanted into nude mice (BALB/c mice) wound, observe its effects on wound healing.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 董蕊,金巖,劉源,趙宇,王容;表皮干細(xì)胞在成人及胎兒不同部位皮膚中的比較研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年18期

2 蔡颯;孫同柱;付小兵;;人表皮角質(zhì)細(xì)胞系培養(yǎng)過程中細(xì)胞生物學(xué)行為和表型的變化[J];感染.炎癥.修復(fù);2007年04期

3 李淑云;張翠萍;付小兵;新燕;;鈣濃度變化對(duì)體外培養(yǎng)人表皮角質(zhì)細(xì)胞增殖的影響[J];感染.炎癥.修復(fù);2007年04期

4 蔡颯;付小兵;孫同柱;王君;韓冰;韓兵;盛志勇;;體外誘導(dǎo)表皮細(xì)胞去分化的初步實(shí)驗(yàn)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2007年10期

5 劉愛軍;黃錦桃;李海標(biāo);;胚胎干細(xì)胞源性表皮干細(xì)胞對(duì)小鼠全層皮膚缺損的修復(fù)[J];解剖學(xué)報(bào);2007年03期

6 張杰,劉偉,叢笑倩,徐展遠(yuǎn),殷德民,曹穎,崔磊,曹誼林;差速粘附方法分選表皮干細(xì)胞及其評(píng)價(jià)[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

7 于海強(qiáng),周燕,華平,譚文松;鈣離子對(duì)鼠角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的影響[J];生物工程學(xué)報(bào);2002年05期

8 謝舉臨,利天增,祁少海,卞徽寧,成建定,徐盈斌,梁慧珍;燙傷大鼠不同深度創(chuàng)面組織中表皮干細(xì)胞分布的初步研究[J];中華燒傷雜志;2003年06期

9 李海紅,付小兵,周崗,陳偉,孫同柱;細(xì)胞角蛋白在皮膚中的表達(dá)[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年07期

10 陳偉,付小兵,孫同柱,孫曉慶,孫鵬,趙志力,盛志勇;表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體在難愈性潰瘍組織中的表達(dá)特征[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2003年10期

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本文編號(hào)：1343495