本文關(guān)鍵詞：Calpain及抑制劑對小鼠RAW264.7細胞RANKL-RANK通路誘導(dǎo)的破骨細胞形成機制的研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2010年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： Calpain 破骨細胞分化 RANKL RAW264.7細胞 骨凹陷

【摘要】：目的 Calpain是一種與破骨細胞活化相關(guān)的蛋白水解酶,可能是抑制破骨細胞活化的干預(yù)靶點。本研究旨在探討Calpain在小鼠RAW264.7細胞中對RANKL誘導(dǎo)的破骨細胞分化的作用機制,以及抑制Calpain對RANKL誘導(dǎo)的破骨細胞活化的作用。 方法 在小鼠RAW264.7細胞中,分為以下6組:RANKLO ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,70ng/ml,100ng/ml, RANKL50ng/ml+Calpastatin50nM,共誘導(dǎo)細胞分化6天。在第2天對RANKLO-100ng/ml共5組測定Calpain活性,在第6天對所有6組進行TRAP染色和陽性細胞計數(shù)、破骨細胞骨凹陷分析,驗證破骨細胞是否分化成熟。另培養(yǎng)小鼠RAW264.7細胞,均使用RANKL50ng/ml進行誘導(dǎo),分為4組：RANKL6h, RANKL24h, RANKL48h,[RANKL+Calpastatin50nM]48h,使用Western Blot方法測定各組的NFκB和c-Fos的蛋白表達,比較Calpastatin抑制前后兩種蛋白表達量的變化。 結(jié)果 在小鼠RAW264.7細胞中,Calpain活性和TRAP陽性細胞數(shù)以及骨凹陷面積均呈RANKL濃度依賴性遞增。使用Calpastatin抑制Calpain活性后與單純以RANKL誘導(dǎo)相比,可以使TRAP陽性細胞數(shù)和骨凹陷面積顯著降低。此外,隨著RANKL誘導(dǎo)時間的延長,NFκB和c-Fos的蛋白表達水平均呈遞增趨勢。而以Calpastatin抑制Calpain活性后與單純以RANKL誘導(dǎo)相比,此兩種蛋白的表達量顯著降低。 結(jié)論 在RANKL誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細胞分化體系中,Calpain活性與破骨細胞活化程度呈正相關(guān)。抑制Calpain可以有效抑制小鼠RAW264.7細胞在RANKL誘導(dǎo)下向破骨細胞的分化。抑制Calpain可以抑制RANKL誘導(dǎo)的NFKB和c-Fos蛋白表達的增加。
[Abstract]:objective
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：1343128