本文關(guān)鍵詞：Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型的制備、評價及部分機(jī)制的研究　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的: 在雞胸骨劍突軟骨中提取、純化Ⅱ型膠原蛋白(CⅡ)并進(jìn)行初步鑒定,為制備膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠模型提供原材料;制備CIA大鼠模型,從形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)及病理組織學(xué)等多角度觀察CIA大鼠模型特點(diǎn);進(jìn)一步闡明CIA大鼠的發(fā)病機(jī)制。 方法和結(jié)果: 1.Ⅱ型膠原蛋白(collagen typeⅡ,CⅡ)的提取、純化與鑒定 以雞胸骨劍突軟骨為原料,采用胃蛋白酶消化法在酸性條件下提取CⅡ;運(yùn)用鹽酸胍抽提,NaCl的反復(fù)鹽析純化,DEAE-52纖維樹脂處理,透析除鹽等方法去除蛋白多糖、CⅡ降解片段及變性產(chǎn)物以純化CⅡ;采用SDS-PAGE電泳和吸收光譜分析的方法鑒定。實驗結(jié)果顯示,所提取的CⅡ與標(biāo)準(zhǔn)品分子量一致,最大吸收峰為226nm,證實所提取純化的蛋白為Ⅱ型膠原。 2.膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠(collagen-induced arthritis,CIA)模型的制備及評價 本實驗室自提CⅡ加完全弗氏佐劑(CFA)采用皮內(nèi)注射的方法建立大鼠CIA模型。容積法檢測大鼠足爪腫脹度并進(jìn)行評分;HE染色法對關(guān)節(jié)組織作病理檢查;ELISA法檢測體內(nèi)抗CⅡ抗體的含量;放免法檢測血清細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α含量。結(jié)果顯示,CIA大鼠足爪的炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈,關(guān)節(jié)腫脹明顯;病理檢查關(guān)節(jié)組織可見大量炎性細(xì)胞浸潤,并伴有組織纖維化;血清中抗CⅡ抗體水平和IL-1β、TNF-α顯著升高,提示膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠模型制備成功。 3.膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠部分機(jī)制的研究 在CIA大鼠模型制備成功的基礎(chǔ)上,用MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng);RT-PCR法檢測CIA大鼠脾組織調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的特異性標(biāo)志物——Foxp3及其表面的TGF-β_1的表達(dá)。結(jié)果顯示,CIA大鼠體內(nèi)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)增強(qiáng);Foxp3mRNA與TGF-β_1 mRNA表達(dá)均降低。 結(jié)論: 1.所提取純化的蛋白為Ⅱ型膠原,該方法提純CⅡ簡單,高效。 2.制備的CIA大鼠模型其臨床表現(xiàn)、免疫學(xué)及病理學(xué)改變均與人類RA相似,模型制備成功。 3.在CIA模型中,淋巴細(xì)胞增減與炎癥反應(yīng)的強(qiáng)弱有密切相關(guān)性,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞因其功能存在缺陷,不能有效抑制效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞增殖活化,導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生自身免疫反應(yīng),引起關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。
[Abstract]:Objective:
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R-332;R593.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐建華,孫桂華,帥宗文,王芬,徐勝前,劉爽,丁長海,徐叔云;口服Ⅱ型膠原治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床研究[J];安徽醫(yī)藥;2001年01期

2 王彥宏,朱平,冷南,解慧;Ⅱ型膠原蛋白的提取純化和鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年19期

3 奚正德,王利,柏峻,張繼英,沈佰華,余奇文,張雁云,張冬青;Ⅱ型膠原特異性T細(xì)胞系與關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2003年09期

4 沈佰華,王利,張繼英,聶紅,余奇文,陳廣潔,程琳玲,柏峻,李寧麗,張冬青,馮國璋,戴號,夏青,胡冬儀,許榮,倪立清;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血與病變部位自身反應(yīng)性T細(xì)胞的免疫學(xué)特征[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2004年08期

5 倪朝輝,李凡;IL-1及其受體拮抗劑與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2004年02期

6 姜旭淦;陳盛霞;王卉放;吳亮;許化溪;;可溶性Ⅱ型膠原蛋白提取純化條件的研究[J];臨床檢驗雜志;2006年06期

7 吳國選,伍津津,朱堂友,魯元剛,畢建軍;人肌腱膠原蛋白的提取及凝膠制備[J];實用醫(yī)藥雜志;2005年03期

8 景沛;膠原蛋白質(zhì)（Ⅰ～ⅩⅧ型）[J];生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會通訊);1995年06期

9 曹慧;許時嬰;;雞關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ型膠原的制備[J];食品科學(xué);2007年04期

10 張其清,王彭延,朱明華,朱太文,辛學(xué)軍,王福君;膠原材料的生物學(xué)評價[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;1989年03期

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