本文關(guān)鍵詞：初免加強(qiáng)免疫增強(qiáng)肺炎鏈球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 肺炎鏈球菌是導(dǎo)致細(xì)菌性肺炎、菌血癥、腦膜炎等侵襲性疾病的重要原因,同時(shí)也是導(dǎo)致急性中耳炎和鼻竇炎的主要病原菌。由于抗生素的廣泛運(yùn)用,已導(dǎo)致多種耐藥菌的產(chǎn)生。已經(jīng)用于臨床的預(yù)防疫苗主要為23價(jià)多糖疫苗和7價(jià)多糖蛋白結(jié)合疫苗,但前者是T細(xì)胞非依賴性抗原,對免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善的2歲以下嬰幼兒以及老年人的保護(hù)性有限;后者包含的血清型有限,而且生產(chǎn)成本高,不適合在我國大范圍應(yīng)用。 PsaA是肺炎鏈球菌毒力因子之一,屬于金屬結(jié)合脂蛋白家族成員,分子量為37-kDa,有309個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,其氨基酸序列和免疫原性高度保守,屬于ABC-型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,PsaA在ABC型轉(zhuǎn)運(yùn)體系中屬于細(xì)胞膜外蛋白質(zhì),一項(xiàng)功能是負(fù)責(zé)結(jié)合金屬錳離子和鋅離子;另一項(xiàng)功能是肺炎鏈球菌的一種黏附素。 本研究根據(jù)基因庫中肺炎鏈球菌表面黏附素的基因序列(序列號U53509),設(shè)計(jì)引物,運(yùn)用PCR法從肺炎鏈球菌基因組中克隆出psaA基因,回收PCR產(chǎn)物并對其進(jìn)行酶切,將其分別插入到pVAX1真核表達(dá)載體和pET28a原核表達(dá)載體,分別構(gòu)建出表達(dá)PsaA的核酸疫苗pVAX1-psaA及其重組原核表達(dá)載體pET28a-psaA,并對它們進(jìn)行鑒定。將pET28a-psaA轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)ITPG誘導(dǎo),采用鎳柱親和層析法純化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。 10只BALB/c小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,將構(gòu)建正確的核酸疫苗pVAX1-psaA對BALB/c小鼠(n=5)進(jìn)行3次核酸疫苗免疫,隔周免疫一次,共3次,為初免,第三次免疫2周后,腹腔免疫50μg重組PsaA純化蛋白。對照組僅隔周免疫3針100μg pVAX1空載體,加強(qiáng)免疫50μl生理鹽水。所有動(dòng)物分別于0、2、4、6、7周尾靜脈取血,間接ELISA法測定其抗PsaA抗體水平。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明我們成功克隆出psaA基因并實(shí)現(xiàn)其亞克隆;所構(gòu)建的psaA核酸疫苗序列正確,同時(shí)成功實(shí)現(xiàn)了PsaA蛋白純化;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明核酸疫苗初免后蛋白加強(qiáng)組的抗PsaA抗體滴度明顯高于其他組別(P＜0.01)。 采用核酸疫苗初免-蛋白加強(qiáng)免疫策略能顯著增強(qiáng)肺炎鏈球菌psaA核酸疫苗的免疫原性,為研制開發(fā)用于臨床的肺炎球菌核酸疫苗奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Streptococcus pneumoniae is an important cause of invasive diseases such as bacterial pneumonia, bacteremia and meningitis. It is also the main pathogen causing acute otitis media and sinusitis. The widespread use of antibiotics has led to a variety of drug-resistant bacteria. Has been used for clinical preventive vaccine for 23 valent polysaccharide vaccine and 7 valent polysaccharide conjugated vaccine, but the former is T cell dependent antigen, on the immune system of immature infants under 2 years old and the elderly protection Co.; the latter includes the serotype is limited, and the production cost is high, not suitable for in a wide range of application in china.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1341824