本文關(guān)鍵詞：Claudin-7可誘導(dǎo)性條件性基因敲除小鼠模型的構(gòu)建和鑒定　出處：《世界華人消化雜志》2015年31期 　論文類(lèi)型：期刊論文

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【摘要】：目的:應(yīng)用Cre-Loxp系統(tǒng)構(gòu)建Claudin-7蛋白在腸道可誘導(dǎo)性條件性基因敲除小鼠模型,并進(jìn)行表型分析.方法:構(gòu)建Claudin-7打靶載體,通過(guò)電擊法轉(zhuǎn)染入小鼠胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞),用正負(fù)篩選法篩選陽(yáng)性ES細(xì)胞并進(jìn)行PCR鑒定和Southern鑒定,利用顯微注射把發(fā)生正確同源重組的ES細(xì)胞注射進(jìn)C57BL/6N小鼠囊胚,移入受體小鼠子宮以獲得嵌合體小鼠.將得到的嵌合體小鼠與C57BL/6N小鼠交配獲得Claudin-7-flox小鼠,該小鼠與PvillinCre ERT2轉(zhuǎn)基因小鼠雜交,通過(guò)子代自交獲得Claudin-7在腸道可誘導(dǎo)性條件性基因敲除(Cldn7fl/fl Villin-Cre ERT2)的小鼠,他莫昔芬(tamoxifen)藥物誘導(dǎo)腸道Claudin-7基因敲除,對(duì)小鼠進(jìn)行表型分析.結(jié)果:獲得Claudin-7-flox小鼠及Claudin-7腸道可誘導(dǎo)性條件性基因敲除小鼠數(shù)只,Claudin-7腸道可誘導(dǎo)性條件性基因敲除小鼠出生時(shí)表型正常,發(fā)育良好,他莫昔芬(tamoxifen)藥物應(yīng)用后,誘導(dǎo)了小鼠腸道上皮細(xì)胞Claudin-7基因表達(dá)的缺失.小鼠出現(xiàn)脫水表現(xiàn),活潑度降低,并出現(xiàn)死亡.結(jié)論:成功構(gòu)建了Claudin-7腸道可誘導(dǎo)性條件性基因敲除小鼠模型,利用他莫昔芬誘導(dǎo)腸道Claudin-7基因敲除,初步構(gòu)建了腸道炎癥模型,為進(jìn)一步研究Claudin-7在腸道腫瘤中的作用奠定了基礎(chǔ).
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院腫瘤中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目,No.81372585 北京市教育委員會(huì)科技計(jì)劃基金面上資助項(xiàng)目,No.KM201410025026 2014年北京市留學(xué)人員科技活動(dòng)擇優(yōu)資助優(yōu)秀類(lèi)項(xiàng)目~~
【分類(lèi)號(hào)】：R-332
【正文快照】： 核心提示:為研究Claudin-7基因在腸道腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的分子生物學(xué)作用,本研究設(shè)計(jì)基于同源重組理論,利用ES細(xì)胞打靶以及顯微注射技術(shù),構(gòu)建了Claudin-7基因在腸道中可誘導(dǎo)條件性敲除的小鼠模型,為體內(nèi)研究Claudin-7的抑瘤功能奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ).李騰雁,王曉楠,李文晶,高宏,丁磊.

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1325360