本文關鍵詞：恒河猴MyD88和TRAM雙基因沉默siRNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：[目的]構(gòu)建恒河猴MyD88和TRAM雙基因沉默siRNA慢病毒載體并感染293T細胞進行鑒定和包裝。 [方法] (一)分別通過4對siRNA與真核質(zhì)粒載體連接得到恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體及恒河猴TRAMRNAi真核質(zhì)粒載體。 (二)通過目的基因恒河猴MyD88和TRAM與真核質(zhì)粒載體連接得到目的基因恒河猴MyD88和TRAM過表達真核質(zhì)粒載體。 (三)恒河猴MyD88和TRAM過表達真核質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染293T細胞后做Western blot檢測二者的表達情況。 (四)通過恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體與恒河猴MyD88過表達真核質(zhì)粒載體及恒河猴TRAMRNAi真核質(zhì)粒載體與TRAM過表達真核質(zhì)粒載體分別共轉(zhuǎn)染293T細胞后做Western blot檢測篩選有效恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體和恒河猴RAMRNAi真核質(zhì)粒載體。 (五)將有效恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體和恒河猴TRAMRNAi真核質(zhì)粒載體共同與慢病毒載體連接得到恒河猴MyD88siRNA和TRAMsiRNA慢病毒載體,經(jīng)PCR鑒定后感染293T細胞進行包裝。 [結(jié)果]通過真核質(zhì)粒外篩得到有效的siRNA靶點,分別是：恒河猴MyD88siRNA序列為GAGGAAGAAAGTCGTGGCTTT,恒河猴TRAMsiRNA序列為AAGTACAAGGCAATGAAGAAA,再共同與慢病毒載體連接成功構(gòu)建了恒河猴MyD88和TRAMsiRNA慢病毒載體。 [結(jié)論]通過siRNA與慢病毒載體連接成功構(gòu)建恒河猴MyD88和TRAMsiRNA慢病毒載體,為后續(xù)實驗應用于感染未成熟樹突狀細胞,進一步研究恒河猴肝移植免疫耐受奠定了實驗基礎。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：1290635