本文關(guān)鍵詞：恒河猴MyD88和TRAM雙基因沉默siRNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：[目的]構(gòu)建恒河猴MyD88和TRAM雙基因沉默siRNA慢病毒載體并感染293T細(xì)胞進(jìn)行鑒定和包裝。 [方法] (一)分別通過(guò)4對(duì)siRNA與真核質(zhì)粒載體連接得到恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體及恒河猴TRAMRNAi真核質(zhì)粒載體。 (二)通過(guò)目的基因恒河猴MyD88和TRAM與真核質(zhì)粒載體連接得到目的基因恒河猴MyD88和TRAM過(guò)表達(dá)真核質(zhì)粒載體。 (三)恒河猴MyD88和TRAM過(guò)表達(dá)真核質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后做Western blot檢測(cè)二者的表達(dá)情況。 (四)通過(guò)恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體與恒河猴MyD88過(guò)表達(dá)真核質(zhì)粒載體及恒河猴TRAMRNAi真核質(zhì)粒載體與TRAM過(guò)表達(dá)真核質(zhì)粒載體分別共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后做Western blot檢測(cè)篩選有效恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體和恒河猴RAMRNAi真核質(zhì)粒載體。 (五)將有效恒河猴MyD88RNAi真核質(zhì)粒載體和恒河猴TRAMRNAi真核質(zhì)粒載體共同與慢病毒載體連接得到恒河猴MyD88siRNA和TRAMsiRNA慢病毒載體,經(jīng)PCR鑒定后感染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝。 [結(jié)果]通過(guò)真核質(zhì)粒外篩得到有效的siRNA靶點(diǎn),分別是：恒河猴MyD88siRNA序列為GAGGAAGAAAGTCGTGGCTTT,恒河猴TRAMsiRNA序列為AAGTACAAGGCAATGAAGAAA,再共同與慢病毒載體連接成功構(gòu)建了恒河猴MyD88和TRAMsiRNA慢病毒載體。 [結(jié)論]通過(guò)siRNA與慢病毒載體連接成功構(gòu)建恒河猴MyD88和TRAMsiRNA慢病毒載體,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用于感染未成熟樹突狀細(xì)胞,進(jìn)一步研究恒河猴肝移植免疫耐受奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 朱旭輝;楊明金;陳濤涌;;CMRF35樣分子對(duì)Toll樣受體信號(hào)通路的影響及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2011年01期

2 張黎;胡明道;陳鵬;;Toll樣受體信號(hào)傳導(dǎo)通路及其在器官移植中作用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2012年11期

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本文編號(hào)：1290635