本文關(guān)鍵詞：非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定、藥敏試驗和耐藥機制的研究

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【摘要】：研究目的：對非結(jié)核分枝桿菌（Non-tuberculosis mycobacteria，NTM）臨床分離株進行菌種鑒定；了解不同抗生素對NTM不同菌種的體外抑菌活性；研究膿腫分枝桿菌對克拉霉素的耐藥機制。 研究方法：1、非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定：通過16S rRNA的引物將278株NTM臨床分離株的DNA進行聚合酶鏈反應（Polymerase chain reaction，PCR），并將菌株的16S rRNA基因片段進行測序，在基本局部比對搜索工具（Basic LocalAlignment Search Tool，BLAST）比對，進行菌種鑒定；通過rpoB和hsp65的引物將70株膿腫分枝桿菌臨床分離株的DNA進行PCR，并將菌株的rpoB和hsp65基因片段進行測序，在BLAST上進行比對，，從而將膿腫分枝桿菌分為不同亞種。2、非結(jié)核分枝桿菌的藥敏試驗：使用ALamar藍微孔板二倍稀釋法(MicroplateAlamar Blue Assay, MABA)對所有NTM臨床株進行包括阿米卡星、頭孢西丁、克拉霉素、阿奇霉素、亞胺培南、莫西沙星、左氧氟沙星、利奈唑胺、利福平、乙胺丁醇和替加環(huán)素在內(nèi)的11種藥物藥敏試驗，對實驗結(jié)果進行包括最小抑菌濃度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）值范圍、MIC50、MIC90、敏感比例、中等敏感比例、耐藥比例等數(shù)據(jù)的分析，并將膿腫分枝桿菌的不同亞種-Abscessus亞種和Bolletii亞種進行χ2或Fisher精確概率法檢驗，了解兩亞種間對不同抗生素耐藥比例的區(qū)別。3、膿腫分枝桿菌對克拉霉素的耐藥機制：膿腫分枝桿菌對克拉霉素的耐藥與erm(41)基因28位點的堿基進行相關(guān)性分析。 研究結(jié)果：1、非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定：根據(jù)16S rRNA將278株NTM臨床株又分為快生長分枝桿菌（Rapidly growing mycobacterium，RGM）和慢生長分枝桿菌（Slowly growing mycobacterium，SGM），其中RGM100株（36%），包括膿腫分枝桿菌（25%）、偶發(fā)分枝桿菌（8%）、Fuerth分枝桿菌（2%）和龜分枝桿菌（1%）；SGM178株（64%），包括胞內(nèi)分枝桿菌（47%）、堪薩斯分枝桿菌（12%）和戈登分枝桿菌（5%）。根據(jù)rpoB和hsp65基因片段將膿腫分枝桿菌又分為Abscessus亞種和Bolletii亞種，其中Abscessus亞種45株，Bolletii亞種25株。2、非結(jié)核分枝桿菌的藥敏試驗：對于RGM，除偶發(fā)分枝桿菌對頭孢西丁耐藥，以及Abscessus亞種對克拉霉素耐藥，大部分RGM臨床株對阿米卡星、阿奇霉素、利奈唑胺、亞胺培南、頭孢西丁、克拉霉素和莫西沙星敏感或中度敏感，對左氧氟沙星耐藥。對于SGM，大部分胞內(nèi)分枝桿菌臨床株對克拉霉素敏感，對利奈唑胺耐藥；大部分堪薩斯分枝桿菌臨床株對阿米卡星、利福平和乙胺丁醇敏感。3、膿腫分枝桿菌對克拉霉素的耐藥機制：erm(41)測序成功的28株Abscessus亞種中，23株為克拉霉素耐藥株，5株為敏感株，耐藥株中22株erm(41)的28位點為T，余1株為C，5株敏感株的28位點均為C。 研究結(jié)論：1、非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定：使用16S rRNA可將278株NTM再分為7種不同菌種，RGM中膿腫分枝桿菌占RGM的大部分，而龜分枝桿菌和Fuerth分枝桿菌數(shù)量較少；SGM中胞內(nèi)分枝桿菌占大部分，而戈登分枝桿菌數(shù)量較少；使用rpoB和hsp65可將膿腫分枝桿菌再分為Abscessus亞種和Bolletii亞種。2、非結(jié)核分枝桿菌的藥敏試驗：阿米卡星、阿奇霉素、利奈唑胺、亞胺培南、頭孢西丁、克拉霉素和莫西沙星對大部分RGM有較好的抑菌活性，而左氧氟沙星對大部分RGM抑菌活性較差。克拉霉素對胞內(nèi)分枝桿菌有較好的抑菌活性，而利奈唑胺的抑菌活性較差；阿米卡星、利福平和乙胺丁醇對堪薩斯分枝桿菌的抑菌活性較好。3、膿腫分枝桿菌對克拉霉素的耐藥機制：erm(41)基因的28號位點堿基可能與克拉霉素耐藥有相關(guān)性。
【學位授予單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R378

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本文編號：1290839