本文關(guān)鍵詞：IFN-λ真核表達載體的建立及其表達產(chǎn)物的生物學功能評估

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【摘要】：目的構(gòu)建IFN-λ真核表達體系,檢測IFN-λ基因在真核細胞中的表達,評估真核細胞表達IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物學作用。方法從poly I∶C刺激的Hu H-7細胞mRNA中克隆IFN-λ1/2基因全長,并進行DNA基因測序;構(gòu)建pc DNA3-IFN-λ1/2質(zhì)粒,酶切鑒定,并將其轉(zhuǎn)染COS-7細胞,應用Western印跡檢測IFN-λ1/2在COS-7細胞中的表達。COS-7細胞表達的IFN-λ1/2作用于人食管癌YES5和T.Tn細胞株,CCK-8法檢測癌細胞增殖,Western印跡檢測凋亡蛋白caspase-3的活化,實時熒光定量PCR檢測ISG15及Mx A抗病毒基因表達。結(jié)果經(jīng)PCR、DNA測序和酶切鑒定,克隆的IFN-λ1/2基因與Gen Bank公布的序列一致,IFN-λ1/2基因序列正確構(gòu)建入pc DNA3載體中;在pc DNA3-IFN-λ1/2轉(zhuǎn)染的COS-7細胞中檢測到IFN-λ1/2蛋白表達;其表達產(chǎn)物可誘導食管癌細胞增殖抑制、活化凋亡蛋白caspase-3,并且上調(diào)抗病毒ISG15及Mx A基因。結(jié)論建立了IFN-λ真核表達體系,即通過pc DNA3-IFN-λ1/2轉(zhuǎn)染COS-7細胞實現(xiàn)了IFN-λ表達;經(jīng)此體系表達的IFN-λ具有抗增殖、誘導凋亡及上調(diào)抗病毒基因表達的生物學作用;此體系的建立為IFN-λ的生物學功能研究和臨床應用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河北醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫學教研室;河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院細胞治療實驗室;河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院乳腺疾病治療中心;河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院婦產(chǎn)科;河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院內(nèi)分泌科;河北醫(yī)科大學流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學教研室;河北醫(yī)科大學護理學院;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81000913) 河北省科學技術(shù)研究與發(fā)展計劃資助項目(10396101D) 河北省科技計劃資助項目(13397703D) 河北省應用基礎(chǔ)研究計劃重點基礎(chǔ)研究項目(14967719D,15962704D) 河北省醫(yī)學科研研究重點課題計劃指導項目(20150626)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 2002年10月,“細胞因子與干擾素”會議在意大利都靈舉行,Kotenko在會議上首次報告發(fā)現(xiàn)了新型人干擾素lambda(IFN-λs)。2003年,相關(guān)論文在Nature Immunology雜志發(fā)表。IFN-λs是一個全新的Ⅲ型干擾素家族,家族成員包括干擾素λ1、λ2和λ3,同時被命名為IL-29、IL-28A和IL-28B;

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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8 林軍;銀杏葉提取物（EGb）對糖尿病大鼠學習記憶障礙保護作用的機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2005年

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10 劉雁云;2型糖尿病、甲亢病陰虛證與NOS CTLA-4相關(guān)性的研究[D];湖北中醫(yī)學院;2006年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 李晗;KLF5和MMP-9表達與膝關(guān)節(jié)軟骨神經(jīng)血管侵入關(guān)系的臨床研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

4 孟景山;孕酮通過NF-κB對腦創(chuàng)傷后大鼠海馬神經(jīng)元COX-2和Caspase-3表達起調(diào)控作用[D];華北煤炭醫(yī)學院;2010年

5 賈欣;普胃丸抗胃潰瘍復發(fā)作用及其抗炎機制研究[D];華北煤炭醫(yī)學院;2010年

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7 張茜;SYBR Green I 同源基因定量PCR快速診斷21-三體綜合征[D];廣西醫(yī)科大學;2003年

8 李玉;肉用綿羊群體遺傳結(jié)構(gòu)和變異的微衛(wèi)星DNA多態(tài)性分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2003年

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本文編號：1290608