本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化前后遺傳穩(wěn)定性的相關(guān)研究

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【摘要】：育齡期女性子宮內(nèi)膜由基底層及功能層組成，在雌、孕激素等固醇類激素作用下發(fā)生周期性的變化。胚胎著床后，子宮內(nèi)膜迅速發(fā)生蛻膜化，為妊娠的建立及維持提供支撐。適宜的子宮內(nèi)膜厚度是胚胎著床的必要條件之一。 胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，ES細(xì)胞)是來源于囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的一種高度未分化細(xì)胞，具有無限增殖和發(fā)育全能性等特點。由于其分化方面的多能性，，它被科學(xué)家們及眾多醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)＜壹挠枇撕裢�。被認(rèn)為或?qū)⒖梢栽谠偕t(yī)學(xué)中發(fā)揮巨大作用。由于先天性、疾病性、人工刮宮等原因，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜始終較薄，許多女性患者無法正常進(jìn)行生育。這種現(xiàn)象在輔助生殖技術(shù)中極為常見。 人胚胎干細(xì)胞（human embryonic stem cells, hESCs）理論上可定向分化為包括生殖細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞�；谶@一設(shè)想，我們認(rèn)為可以通過人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)，模擬體內(nèi)環(huán)境使其向子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化。目前有學(xué)者將成體干細(xì)胞試圖誘導(dǎo)成子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞，也有學(xué)者通過重建損傷小鼠子宮內(nèi)膜行胚胎干細(xì)胞移植，進(jìn)行胚胎干細(xì)胞或成體干細(xì)胞在損傷或薄型子宮內(nèi)膜治療、修復(fù)方面的探討。于此同時，我中心的實驗團(tuán)隊在近幾年里，也在人胚胎干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究中進(jìn)行過摸索。這些研究主要包括人胚胎干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化方案的探索以及在這一過程中的某些通路因子對高效誘導(dǎo)分化所起的作用。 通過基因芯片技術(shù)可以全面的了解不同位點誘導(dǎo)前后的樣本DNA變化情況，并通過數(shù)據(jù)庫找出相關(guān)突變基因的功能。目前，鮮見關(guān)于子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)過程中遺傳學(xué)穩(wěn)定性的相關(guān)報道。 目的： 通過SNP芯片掃描檢測的方法，分析hESC系在誘導(dǎo)分化為子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞前后基因遺傳特征及其變化情況，從而探索出更為成熟安全的誘導(dǎo)分化方案，為今后細(xì)胞移植的安全性提供實驗數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法： 1.體外通過擬胚體途徑將hESCs定向分化為子宮內(nèi)膜樣細(xì)胞，光鏡觀察子宮內(nèi)膜樣細(xì)胞形態(tài)。免疫熒光檢測子宮內(nèi)膜樣細(xì)胞的特異性標(biāo)志物角蛋白。 2.提取內(nèi)膜樣細(xì)胞的基因組DNA，按胚胎干細(xì)胞系來源分為早期、晚期代數(shù)不同的組別通過cytoSNP芯片檢測誘導(dǎo)分化前后的不同代次細(xì)胞遺傳變化。 結(jié)果： 本實驗共進(jìn)行四組hESCs誘導(dǎo)分化前后的實驗數(shù)據(jù)對比，共六個樣本。四組樣本分別進(jìn)行質(zhì)量檢測后進(jìn)行芯片結(jié)果的兩兩互相比較。組1和組2的早期代數(shù)hESCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化后突變SNP位點達(dá)2300個，組3晚期代數(shù)的hESCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化后突變SNP位點達(dá)3770個，組4動態(tài)觀察了早期傳代至晚期的誘導(dǎo)分化后的子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞其上的突變SNP位點達(dá)到6956個。 結(jié)論： 1.應(yīng)用擬胚體途徑添加17-β雌二醇等誘導(dǎo)分化因子可成功將人胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞。 2.晚期代數(shù)較早期代數(shù)誘導(dǎo)分化過程中，隨著細(xì)胞代數(shù)的增加，SNP變異的幾率增加、變異數(shù)量逐漸增大。誘導(dǎo)分化早期代數(shù)的子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞較晚期代數(shù)遺傳穩(wěn)定性更好。 3.在將人胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為子宮內(nèi)膜上皮樣細(xì)胞的過程中代數(shù)相差20代時變異位點達(dá)到7000個。位于1號染色體、7號染色體的外顯子突變最為顯著。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 丘彥,桂文武,曾品鴻,徐紅兵,廖慧,周永芳,張揚;枸櫞酸西地那非片對不孕婦女子宮和卵巢動脈血流的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2003年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王永剛;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜細(xì)胞分化的體外實驗[D];中南大學(xué);2012年

本文編號：1277079