本文關(guān)鍵詞：腸出血型大腸埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回補(bǔ)株的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 大腸埃希菌 espF基因 同源重組 突變株 基因回補(bǔ)

【摘要】：目的利用Red同源重組系統(tǒng)敲除腸出血型大腸埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33質(zhì)粒為載體的esp F基因回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。方法設(shè)計(jì)1對(duì)同源臂引物擴(kuò)增卡那霉素抗性打靶片段,將抗性打靶片段電轉(zhuǎn)入含有PKD46質(zhì)粒的EDL933w,在PKD 46介導(dǎo)的重組系統(tǒng)幫助下,打靶片段和菌體esp F基因發(fā)生同源重組,PCR和測(cè)序驗(yàn)證;PCR擴(kuò)增esp F及其核苷酸片段的整個(gè)ORF區(qū)序列,將其克隆入p BAD33質(zhì)粒,分別將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入相應(yīng)的缺失株,以構(gòu)建出相應(yīng)的回補(bǔ)突變株。采用RT-PCR的方法驗(yàn)證在相應(yīng)的回補(bǔ)突變株中esp F及其核苷酸片段是否轉(zhuǎn)錄。結(jié)果構(gòu)建了esp F基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突變菌株和相應(yīng)的回補(bǔ)株,且esp F基因及其核苷酸片段在回補(bǔ)株中均發(fā)生轉(zhuǎn)錄。結(jié)論本研究運(yùn)用Red重組系統(tǒng)構(gòu)建了腸出血型大腸埃希菌O157:H7 esp F基因缺失株,并建立以p BAD33質(zhì)粒為載體的EHEC O157:H7基因回補(bǔ)方法,為進(jìn)一步研究腸出血型大腸埃希菌中esp F基因的調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院BSL-3實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81371765) 廣東省自然科學(xué)基金(S2013010014393)~~
【分類號(hào)】：R378.21
【正文快照】： 腸出血型大腸埃希菌(EnterohemorrhagicEscherichia coli,EHEC)O157:H7是一種食源性人畜共患腸道病原微生物,可導(dǎo)致食物中毒,引起人和動(dòng)物嚴(yán)重的腹瀉、出血性腸炎(haemorrhagic colitis,HC)、溶血性尿毒綜合癥(Haemolyticuraemic syndrome,HUS)等[1-3]。其致病作用主要通過產(chǎn)

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本文編號(hào)：1276856