本文關(guān)鍵詞：原子力顯微鏡對(duì)10種常用單克隆抗體及人體淋巴細(xì)胞結(jié)合抗體后的觀察

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【摘要】：目的 應(yīng)用原子力顯微鏡（Atomic Force Microscope, AFM）直觀地觀察10種常用單克隆抗體的形態(tài)、正常淋巴細(xì)胞形態(tài)、淋巴細(xì)胞結(jié)合不同抗體后細(xì)胞膜表面的形態(tài)差異，從納米級(jí)水平提供單克隆抗體及抗體結(jié)合于淋巴細(xì)胞表面的形態(tài)圖，為免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry）納米級(jí)研究及抗原的精確定位和抗原異常表達(dá)現(xiàn)象的深入認(rèn)識(shí)提供新思路。 方法 1、單克隆抗體 用粘附沉淀法及10%福爾馬林蒸汽固定法對(duì)10種常用單克隆抗體：廣譜細(xì)胞角蛋白（CK-pan）、波形蛋白（Vimentin）、白細(xì)胞共同抗原（LCA）、甲狀腺球蛋白（TG）、S100蛋白、細(xì)胞角蛋白7（CK7）、Dog-1、CD3蛋白、CD20蛋白、CD30蛋白進(jìn)行固定，并在AFM下掃描，觀察各組抗體形態(tài)。 2、淋巴細(xì)胞 將手術(shù)取出的新鮮淋巴結(jié)或扁桃體組織進(jìn)行印片，并按照在淋巴細(xì)胞上滴加抗體的不同分為五組：第一組為空白對(duì)照組（未滴加抗體）；第二組為陰性對(duì)照組（滴加上皮膜抗原）；第三組為CD3蛋白實(shí)驗(yàn)組；第四組為CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組；第五組為CD3蛋白和CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組。應(yīng)用AFM的Tapping模式對(duì)淋巴細(xì)胞抗體結(jié)合前后的細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)進(jìn)行掃描。應(yīng)用AFM軟件分析系統(tǒng)測量和分析細(xì)胞膜表面重要參數(shù)即平均粗糙度（Ra）、最大峰高度（Rmax），然后利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所測得的細(xì)胞表面平均粗糙度、最大峰高度數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 1、病理學(xué)結(jié)果 在光鏡下觀察各組淋巴細(xì)胞印片免疫組化染色結(jié)果，可看出淋巴細(xì)胞為小圓形，核濃染，胞漿少。EMA陰性對(duì)照組（扁桃體組織印片）中鱗狀細(xì)胞為陽性，淋巴細(xì)胞陰性。CD3蛋白實(shí)驗(yàn)組、CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組、CD3蛋白和CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組鱗狀細(xì)胞為陰性、淋巴細(xì)胞陽性，但不能分辨是否有淋巴細(xì)胞同時(shí)結(jié)合CD3蛋白和CD20蛋白。 2、AFM掃描結(jié)果 應(yīng)用原子力顯微鏡分別觀察10種常用單克隆抗體，其形態(tài)各不相同，在2D形態(tài)圖大其致可分為四種：類圓形、不規(guī)則長桿形、三角形和菱形。單個(gè)整體細(xì)胞的輪廓各組無明顯差異，，淋巴細(xì)胞呈圓形、橢圓形，外周一圈狹窄的“暈環(huán)”�？瞻讓�(duì)照組細(xì)胞局部掃描見細(xì)胞膜表面高低起伏，隆起欠規(guī)則，隆起之間形成的凹陷寬度與深度不等。三個(gè)組實(shí)驗(yàn)組中淋巴細(xì)胞細(xì)胞膜表面形態(tài)與空白對(duì)照組相比，可見細(xì)胞膜表面有顆粒狀物質(zhì)附著，形狀較規(guī)則、數(shù)量不等、分布不均勻。局部掃描可見顆粒物質(zhì)附著于細(xì)胞膜表面隆起上，細(xì)胞膜表面隆起處更高，最大峰高度隨之增加，膜表面高低起伏明顯，粗糙度明顯變大。在CD3蛋白和CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組的局部圖中顯示了淋巴細(xì)胞同時(shí)結(jié)合CD3蛋白和CD20蛋白兩種抗體。EMA陰性對(duì)照組較空白對(duì)照組細(xì)胞膜表面形態(tài)無明顯差異。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果 10種單克隆抗體寬度平均數(shù)從560nm至1.90μm不等，CD3蛋白、CD20蛋白、CD30蛋白的寬度和最大峰高度小于其他各組，但平均粗糙度大于其他各組。CD3蛋白實(shí)驗(yàn)組、CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組、CD3蛋白和CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組分別與空白對(duì)照組及EMA陰性對(duì)照組間的最大峰高度和平均粗糙度的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。但CD3蛋白實(shí)驗(yàn)組、CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組、CD3蛋白和CD20蛋白實(shí)驗(yàn)組三組之間的最大峰高度和平均粗糙度的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論 本研究應(yīng)用AFM掃描的10種單克隆抗體中形態(tài)各不相同，其2D形態(tài)圖大其致可分為四種：類圓形、不規(guī)則長桿形、三角形和菱形。應(yīng)用AFM觀察膜抗體結(jié)合后淋巴細(xì)胞細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)，獲得了清晰、直觀的圖像。CD3蛋白、CD20蛋白結(jié)合淋巴細(xì)胞后在AFM下的成像中各有不同。主要是在同一個(gè)淋巴細(xì)胞膜上顯示出CD3蛋白和CD20蛋白兩種抗體，為研究正常淋巴細(xì)胞以及淋巴瘤瘤細(xì)胞中抗原的異常表達(dá)和共同表達(dá)提供形態(tài)學(xué)依據(jù)，也為免疫組織化學(xué)診斷的進(jìn)一步應(yīng)用提供深入探討的線索。
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1275970