本文關(guān)鍵詞：CRISPR敲減豬CMAH基因的質(zhì)粒構(gòu)建及慢病毒的包裝

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【摘要】：目的:構(gòu)建靶向豬CMAH基因的慢病毒CRISPR-Cas9敲減質(zhì)粒及進行慢病毒的包裝。方法:設(shè)計并合成CMAH基因gRNA的靶序列并將其與Lenti CRISPR-v2載體連接;連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,篩選出重組子后酶切鑒定與測序;制備VSV-G、Rev、Gag/Pol等質(zhì)粒用于包裝慢病毒。結(jié)果:成功構(gòu)建豬CMAH基因CRISPR-Cas9敲減質(zhì)粒并包裝出相應(yīng)慢病毒。結(jié)論:利用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)能夠構(gòu)建敲減豬CMAH基因的質(zhì)粒并能夠使用其包裝出病毒,為后續(xù)感染豬動脈內(nèi)皮細胞(porcine aorta endothelial cell,PAEC)細胞敲減CMAH基因及功能驗證奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 深圳市第二人民醫(yī)院;深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院深圳市馴化器官醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究開發(fā)中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81200465) 深圳市“三名”工程(馴化器官)項目(2015)
【分類號】：R373
【正文快照】： 豬單磷酸胞嘧啶-N-乙酰神經(jīng)氨酸羥化酶(cytidinemonophospho-N-acetylneuraminic acid hydroxylase,CMAH)是哺乳動物內(nèi)將N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Gc)轉(zhuǎn)化成N-乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)的酶。Neu5Gc和Neu5Ac是哺乳動物體內(nèi)唾液酸存在的兩種形式,而Neu5Gc是Neu5Ac的羥基化衍生物。研究

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本文編號：1267946