本文關(guān)鍵詞：不同亞類小鼠IgG對SpA和SpG單結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的隨機(jī)組合噬菌體文庫的體外進(jìn)化研究

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【摘要】：目的判斷不同亞類小鼠IgG Fc段構(gòu)像及與SpA或SpG的結(jié)合特點,采用不同亞類小鼠IgG對SpA和SpG單結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的隨機(jī)組合噬菌體展示文庫進(jìn)行親和篩選。方法不同亞類小鼠IgG對噬菌體文庫進(jìn)行親和篩選,獲得具有結(jié)合優(yōu)勢的單結(jié)構(gòu)域排列組合,噬菌體ELISA法來比較其與不同亞類小鼠IgG的結(jié)合特性,優(yōu)勢組合分子經(jīng)原核表達(dá)蛋白,HRP標(biāo)記后,ELISA法進(jìn)一步來比較其與小鼠不同亞類IgG的結(jié)合特性。結(jié)果小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3分別經(jīng)過5、4、5和5輪親和篩選后,其文庫的展示片段大小均為2個domain,表明進(jìn)化完全。測序分析顯示:小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3篩選得到的具有結(jié)合優(yōu)勢組合分子分別是D-D、D-D、A-C和D-C。噬菌體ELISA驗證結(jié)合優(yōu)勢組合分子對小鼠不同亞類IgG的結(jié)合能力;蛋白經(jīng)HRP標(biāo)記后的ELISA結(jié)果和篩選不完全一致,但其結(jié)合強(qiáng)弱具有一致性,均為:IgG3IgG2aIgG2bIgG1。結(jié)論得到3種不存在于天然SpA、SpG分子中,分別與不同亞類小鼠IgG具有較強(qiáng)結(jié)合作用的新型組合分子D-D、A-C和D-C,為進(jìn)一步研究IgG Fc段構(gòu)像及與SpA或SpG的結(jié)合特點提供了新的參考分子。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室;第二軍醫(yī)大學(xué)病原生物學(xué)教研室;安慶醫(yī)藥高等專科學(xué)校;
【基金】：安徽省教育廳自然基金項目(編號:KJ2010A117) 國家自然科學(xué)基金(編號:30872405、30872246、30972632、30972799)
【分類號】：R392.7
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal proteinA,SpA)[1]和鏈球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)[2]是研究最多的細(xì)菌免疫球蛋白結(jié)合蛋白[3],其中SpA的分子量大約57 ku,含有5個具有Ig結(jié)合功能且重復(fù)串聯(lián)的結(jié)構(gòu)域,為E、D、A、B、C[4]。SpG分子量為65 ku,包含3個具有Ig結(jié)合

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