本文關(guān)鍵詞：破骨細(xì)胞微管正端蛋白動態(tài)成像觀察

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【摘要】：目的采用活細(xì)胞成像技術(shù)觀察破骨細(xì)胞微管正端蛋白EB1在細(xì)胞內(nèi)的分布及運動,初步研究微管在破骨細(xì)胞功能中的作用。方法 1用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法(陽離子脂質(zhì)體Lip2000)轉(zhuǎn)染EB1-GFP基因至Raw264.7細(xì)胞系,G418篩選轉(zhuǎn)染成功的Raw264.7細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察后GFP蛋白免疫熒光染色確定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染EB1-GFP的Raw264.7細(xì)胞系建立;2活細(xì)胞工作站下觀察轉(zhuǎn)染EB1-GFP的Raw264.7細(xì)胞中EB1蛋白的運動;3用含100ng/m LRANKL和30ng/m L M-CSF的培養(yǎng)基分別誘導(dǎo)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染EB1-GFP的Raw264.7細(xì)胞與正常Raw264.7細(xì)胞為破骨細(xì)胞,進行TRAP染色鑒定,比較兩組細(xì)胞形態(tài)有無差別;4Raw264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)出破骨細(xì)胞后,用細(xì)胞免疫熒光染色方法觀察破骨細(xì)胞EB1蛋白的形態(tài)及分布;5活細(xì)胞工作站下觀察穩(wěn)轉(zhuǎn)EB1-GFP的Raw264.7細(xì)胞誘導(dǎo)出的破骨細(xì)胞內(nèi)EB1蛋白的運動狀態(tài)。結(jié)果 1脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染EB1-GFP基因的Raw264.7細(xì)胞系;2觀察到破骨前體細(xì)胞Raw264.7的微管正端蛋白(EB1)的運動軌跡;3轉(zhuǎn)染EB1-GFP基因的Raw264.7細(xì)胞與正常Raw264.7細(xì)胞誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞TRAP染色無明顯差別;4活細(xì)胞工作站觀察破骨細(xì)胞微管正端蛋白EB1的運動狀態(tài),結(jié)果表明破骨細(xì)胞微管活動性較破骨前體細(xì)胞Raw264.7活動性低。結(jié)論 1EB1-GFP基因?qū)ζ乒乔绑w細(xì)胞系Raw264.7誘導(dǎo)破骨細(xì)胞無明顯影響;2微管活動性降低可能與破骨細(xì)胞骨吸收活性相關(guān)。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院骨科;
【基金】：江蘇省臨床醫(yī)學(xué)科技專項資助(BL2012002)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 正常骨組織的維持建立在破骨細(xì)胞的骨吸收和成骨細(xì)胞骨形成的動態(tài)平衡基礎(chǔ)上。破骨細(xì)胞數(shù)目改變和活性改變是導(dǎo)致各種代謝性骨病的主要原因,因此破骨細(xì)胞成為了研究的熱點和重點。近年來的研究認(rèn)為細(xì)胞骨架在破骨細(xì)胞功能的發(fā)揮中起重要作用,破骨細(xì)胞分化成熟后,由微絲組成的

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【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁倬斌,李向軍,李s，

本文編號：1264599