本文關(guān)鍵詞：肌小節(jié)Z線蛋白Cypher泛素化降解的初步研究

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【摘要】：細(xì)胞功能的完整性以及穩(wěn)態(tài)的維持都有賴于細(xì)胞內(nèi)蛋白合成和降解的平衡。由于心肌處于不斷的收縮舒張中,這種作用顯得尤為重要。心肌收縮的基本單位是肌小節(jié)(Sarcomeres),肌小節(jié)蛋白正常的自我更新功能對(duì)維持其結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。肌小節(jié)Z線蛋白以及胞質(zhì)蛋白的過(guò)度積聚則會(huì)導(dǎo)致一些疾病的發(fā)生,如肌纖維性肌病(Myofibrillar myopathy)。與其他器官組織類似,心肌肌小節(jié)蛋白的自我更新與泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(Ubiquitin-proteasome system)的功能密切相關(guān)。 泛素-蛋白酶體介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解通路控制著真核細(xì)胞內(nèi)絕大多數(shù)蛋白質(zhì)的選擇性降解,主要由兩個(gè)過(guò)程組成,即蛋白的泛素化修飾以及泛素化修飾的蛋白被蛋白酶體識(shí)別并降解。該通路對(duì)于生命活動(dòng)具有重要的調(diào)控意義。 Cypher是一個(gè)含有PDZ和LIM結(jié)構(gòu)域的蛋白,主要在橫紋肌中表達(dá),對(duì)于維持肌小節(jié)正常的結(jié)構(gòu)和功能起重要作用。Cypher在心臟中特異性敲除可導(dǎo)致心功能的降低以及擴(kuò)張性心肌病的發(fā)生。ZASP (Z-band alternatively Spliced PDZ-motif protein)基因,即Cypher在人的對(duì)應(yīng)基因,突變也可以導(dǎo)致人心肌肥大以及擴(kuò)張性心肌病的發(fā)生。 本課題旨在進(jìn)行肌小節(jié)Z線蛋白Cypher泛素化降解途徑的研究。首先利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與Cypher的ZM片段相互作用的泛素-蛋白酶體系統(tǒng)相關(guān)酶。通過(guò)成功構(gòu)建誘餌質(zhì)粒,文庫(kù)篩選,序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)ZM片段能夠與泛素化蛋白降解途徑相關(guān)蛋白UBE2N (Ubiquitin-conjugating enzyme E2N)以及USP48(Ubiquitin specific peptidase48)相互作用。隨后在HEK293細(xì)胞內(nèi),對(duì)USP48與Cypher在體外的相互作用作了驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)的第二部分,則研究了Cypher突變體對(duì)泛素化降解的影響,發(fā)現(xiàn)Cypher第四外顯子206位點(diǎn)的突變(T206I)可以導(dǎo)致Cypher降解增加,而這一過(guò)程可能是影響了泛素與Cypher的結(jié)合所導(dǎo)致的。最后,我們還對(duì)Cypher在Stat3泛素化降解中的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)作了初步探究。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1227640