本文關鍵詞：肌小節(jié)Z線蛋白Cypher泛素化降解的初步研究

  更多相關文章： Cypher 泛素化 USP48 突變 相互作用

【摘要】：細胞功能的完整性以及穩(wěn)態(tài)的維持都有賴于細胞內蛋白合成和降解的平衡。由于心肌處于不斷的收縮舒張中,這種作用顯得尤為重要。心肌收縮的基本單位是肌小節(jié)(Sarcomeres),肌小節(jié)蛋白正常的自我更新功能對維持其結構和功能具有重要意義。肌小節(jié)Z線蛋白以及胞質蛋白的過度積聚則會導致一些疾病的發(fā)生,如肌纖維性肌病(Myofibrillar myopathy)。與其他器官組織類似,心肌肌小節(jié)蛋白的自我更新與泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(Ubiquitin-proteasome system)的功能密切相關。 泛素-蛋白酶體介導的蛋白質降解通路控制著真核細胞內絕大多數(shù)蛋白質的選擇性降解,主要由兩個過程組成,即蛋白的泛素化修飾以及泛素化修飾的蛋白被蛋白酶體識別并降解。該通路對于生命活動具有重要的調控意義。 Cypher是一個含有PDZ和LIM結構域的蛋白,主要在橫紋肌中表達,對于維持肌小節(jié)正常的結構和功能起重要作用。Cypher在心臟中特異性敲除可導致心功能的降低以及擴張性心肌病的發(fā)生。ZASP (Z-band alternatively Spliced PDZ-motif protein)基因,即Cypher在人的對應基因,突變也可以導致人心肌肥大以及擴張性心肌病的發(fā)生。 本課題旨在進行肌小節(jié)Z線蛋白Cypher泛素化降解途徑的研究。首先利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與Cypher的ZM片段相互作用的泛素-蛋白酶體系統(tǒng)相關酶。通過成功構建誘餌質粒,文庫篩選,序列比對,發(fā)現(xiàn)ZM片段能夠與泛素化蛋白降解途徑相關蛋白UBE2N (Ubiquitin-conjugating enzyme E2N)以及USP48(Ubiquitin specific peptidase48)相互作用。隨后在HEK293細胞內,對USP48與Cypher在體外的相互作用作了驗證。實驗的第二部分,則研究了Cypher突變體對泛素化降解的影響,發(fā)現(xiàn)Cypher第四外顯子206位點的突變(T206I)可以導致Cypher降解增加,而這一過程可能是影響了泛素與Cypher的結合所導致的。最后,我們還對Cypher在Stat3泛素化降解中的結構基礎作了初步探究。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363

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本文編號：1227640