本文關(guān)鍵詞：Accutase和胰蛋白酶消化傳代對(duì)人胚紋狀體來源神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的探討Accutase和胰蛋白酶消化神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)后對(duì)其凋亡過程的影響。方法來自人類12~16周自然流產(chǎn)胚胎紋狀體組織,分離并體外培養(yǎng)NSCs,將體外培養(yǎng)的第3~5代神經(jīng)球,分別用胰蛋白酶、Accutase消化,消化過程中僅振蕩打散,避免巴斯德吸管反復(fù)吹打。將神經(jīng)球打散成的單細(xì)胞懸液接種。用Annexin V/碘化丙啶染色、Hoechst 33342活細(xì)胞染色鏡下觀察等方法,在培養(yǎng)傳代后2和24 h時(shí)間點(diǎn)檢測神經(jīng)干細(xì)胞凋亡率。結(jié)果兩種酶消化后立即用臺(tái)盼藍(lán)染色判斷細(xì)胞活性,Accutase消化后活細(xì)胞比例為(91.65±4.43)%,胰蛋白酶僅有(83.10±6.76)%,二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。體外培養(yǎng)的第3~5代人胚紋狀體NSCs形成的神經(jīng)球傳代后2 h,Accutase和胰蛋白酶傳代的細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),而到24 h時(shí)間點(diǎn),Accutase消化的細(xì)胞凋亡率經(jīng)Annexin V/碘化丙啶、Hoechst 33342活細(xì)胞染色兩種方法檢測已經(jīng)達(dá)到50%,而胰蛋白酶消化后的細(xì)胞凋亡率在此時(shí)間點(diǎn)維持在15%~20%。Accutase消化后的NSCs生長4 d后,克隆形成率和神經(jīng)球直徑分別為(7.83±1.32)%和(43.5±9.76)μm,均顯著低于胰蛋白酶傳代組的(19.22±3.66)%和(58.4±18.73)μm(P0.01)。結(jié)論雖然臺(tái)盼藍(lán)染色顯示Accutase消化神經(jīng)球后的細(xì)胞存活比胰蛋白酶更多,但消化后24 h內(nèi),Accutase消化的細(xì)胞凋亡率顯著升高,最終神經(jīng)球新克隆形成率低,直徑更小。胰蛋白酶消化振蕩打散神經(jīng)球后的凋亡率較Accutase具有明顯優(yōu)勢;神經(jīng)球消化后臺(tái)盼藍(lán)即時(shí)染色的結(jié)果不足以預(yù)示后期NSCs凋亡率。
【作者單位】： 長治醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室;中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金(81100057) 長治醫(yī)學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(CX201408)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： Effect of Accutase or Trypsin Dissociation on the Apoptosis of HumanStriatum-derived Neural Stem CellsLI Ting1,2,LI Chen1,ZHANG Cui-ying1,ZHAO Jie31Department of Physiology,Changzhi Medical College,Changzhi,Shanxi 046000,China2Department of Pathophysiolo

【共引文獻(xiàn)】

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7 胡f3e，

本文編號(hào)：1224886