發(fā)布時(shí)間：2017-11-13 03:10

  本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲(chóng)凋亡誘導(dǎo)因子SjAIF功能區(qū)片段的克隆及表達(dá)分析

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【摘要】：目的克隆表達(dá)日本血吸蟲(chóng)凋亡誘導(dǎo)因子(SjAIF)功能區(qū)片段,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步分析。方法應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)凋亡誘導(dǎo)因子的功能區(qū)片段,構(gòu)建原核重組表達(dá)質(zhì)粒并誘導(dǎo)其表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR分析其在不同發(fā)育時(shí)期童蟲(chóng)和成蟲(chóng)的轉(zhuǎn)錄水平,通過(guò)Western-blot和間接ELISA法分析重組蛋白的抗原性和免疫原性,應(yīng)用免疫組化分析該蛋白在蟲(chóng)體內(nèi)的分布情況。結(jié)果克隆了SjAIF功能區(qū)片段,大小為831bp。成功構(gòu)建了原核重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-SjAIF,并在大腸桿菌中獲得表達(dá),重組蛋白分子量35kD。實(shí)時(shí)定量PCR分析表明SjAIF基因在童蟲(chóng)和成蟲(chóng)的各個(gè)發(fā)育階段均有轉(zhuǎn)錄,其中7d~21d蟲(chóng)體表達(dá)量較低,42d和28d蟲(chóng)體表達(dá)量較高,雌蟲(chóng)表達(dá)量高于雄蟲(chóng)。重組蛋白具有較好的抗原性和免疫原性,免疫小鼠后誘導(dǎo)產(chǎn)生了較高水平的特異性IgG抗體。該蛋白主要存在于日本血吸蟲(chóng)體被,少部分分布于實(shí)質(zhì)組織中。結(jié)論成功表達(dá)了SjAIF基因的功能區(qū)片段,對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了初步分析,為進(jìn)一步研究該基因生物學(xué)功能和作用提供了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81271871)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：R383.2
【正文快照】： (1.College of Life and Environmental Sciences,Shanghai Normal University,Shanghai 200234,China;2.Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science/Key Laboratory of Animal Parasitology,Ministry of Agriculture,Shanghai 200241,

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10 張e，

本文編號(hào)：1178824