本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲凋亡誘導因子SjAIF功能區(qū)片段的克隆及表達分析

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【摘要】：目的克隆表達日本血吸蟲凋亡誘導因子(SjAIF)功能區(qū)片段,并對其生物學特性進行初步分析。方法應用PCR技術(shù)擴增日本血吸蟲凋亡誘導因子的功能區(qū)片段,構(gòu)建原核重組表達質(zhì)粒并誘導其表達,實時定量PCR分析其在不同發(fā)育時期童蟲和成蟲的轉(zhuǎn)錄水平,通過Western-blot和間接ELISA法分析重組蛋白的抗原性和免疫原性,應用免疫組化分析該蛋白在蟲體內(nèi)的分布情況。結(jié)果克隆了SjAIF功能區(qū)片段,大小為831bp。成功構(gòu)建了原核重組表達質(zhì)粒pET-28a(+)-SjAIF,并在大腸桿菌中獲得表達,重組蛋白分子量35kD。實時定量PCR分析表明SjAIF基因在童蟲和成蟲的各個發(fā)育階段均有轉(zhuǎn)錄,其中7d~21d蟲體表達量較低,42d和28d蟲體表達量較高,雌蟲表達量高于雄蟲。重組蛋白具有較好的抗原性和免疫原性,免疫小鼠后誘導產(chǎn)生了較高水平的特異性IgG抗體。該蛋白主要存在于日本血吸蟲體被,少部分分布于實質(zhì)組織中。結(jié)論成功表達了SjAIF基因的功能區(qū)片段,對其生物學特性進行了初步分析,為進一步研究該基因生物學功能和作用提供了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海師范大學生命與環(huán)境科學學院;中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點開放實驗室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家自然科學基金(No.81271871)資助~~
【分類號】：R383.2
【正文快照】： (1.College of Life and Environmental Sciences,Shanghai Normal University,Shanghai 200234,China;2.Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science/Key Laboratory of Animal Parasitology,Ministry of Agriculture,Shanghai 200241,

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10 張e，

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